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《靶向化布魯氏菌樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗的試制的研究(7354)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、簽字日期：2占11年o6月09-Et學(xué)位論文作者畢業(yè)后去向：工作單位：．通訊地址：簽字日期：加f7年D6月也日電話：摘要㈩I(lǐng)IIIIIIIIIIIIUIY1897299布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的一種人畜共患傳染病。布魯氏菌主要經(jīng)由粘膜和傷口感染，能夠引起家畜的自發(fā)性流產(chǎn)和人的“波浪熱”。大量資料顯示，布魯氏菌的易感細(xì)胞是巨噬細(xì)胞，該細(xì)胞感染布魯氏菌后，在其胞內(nèi)大量繁殖，使其抗原提呈能力喪失，從而使宿主的免疫功能破壞而引發(fā)持續(xù)性感染。因此，如何幫助患病動(dòng)物建立有效的免疫應(yīng)答機(jī)制是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriticcell，DC)是迄
2、今為止發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)功能最強(qiáng)的專職抗原提呈細(xì)胞。適應(yīng)性免疫應(yīng)答的啟動(dòng)需要DC的抗原提呈。DC不僅能刺激已活化或記憶性的T細(xì)胞，而且能顯著刺激初始T細(xì)胞的增殖，它觸發(fā)的是點(diǎn)放射狀放大反應(yīng)，1個(gè)DC可以激活100"-3000個(gè)T細(xì)胞。因此DC是體內(nèi)免疫反應(yīng)的始動(dòng)者，在免疫治療中有著巨大的魅力。本實(shí)驗(yàn)圍繞DC進(jìn)行疫苗研究，并在動(dòng)物試驗(yàn)中檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)疫苗的免疫效果。研究表明，布魯氏菌的外膜蛋fj(Outermembraneproteins，OMPs)有很強(qiáng)的免疫原性。本實(shí)驗(yàn)采用去污劑連續(xù)抽提法提取了布魯氏菌的全外膜蛋白，經(jīng)SDS．PAGE電泳后，選擇了抗原表位
3、和糖基化位點(diǎn)較多的37．5kD與47．2kD的蛋白作為疫苗抗原候選蛋白，經(jīng)過(guò)分離、電洗脫純化得到這兩種布魯氏菌OMPs。采用a．D．甘露吡喃異硫氰酸苯酯對(duì)這兩種蛋白質(zhì)抗原進(jìn)行甘露糖修飾，以靶向體內(nèi)抗原提呈功能最強(qiáng)的專職抗原提呈細(xì)胞一樹(shù)突狀細(xì)胞，再經(jīng)間苯二酚．硫酸法鑒定兩種蛋白質(zhì)抗原糖基修飾效果。采取方差分析比較布魯氏菌外膜蛋白糖基修飾后的免疫效果，以血清中抗體水平與淋巴細(xì)胞增殖能力作為檢測(cè)指標(biāo)，隨機(jī)選取20只小鼠，并隨機(jī)分成A、B、C和D四組，分別肌注布魯氏菌S2商品疫苗、純化的布魯氏菌兩種混合外膜蛋白、甘露糖修飾化的布魯氏菌外膜蛋白和PBS。
4、試驗(yàn)結(jié)果表明：二免后4d、7d、lOd，A組、B組和C組間血清抗體水平差異不顯著(尸>O．05)，但A組、B組、C組與D組相比差異極顯著(尸<0．01)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明布魯氏菌S2商品疫苗、布魯氏菌兩種混合外膜蛋白、修飾化的布魯氏菌外膜蛋白免疫小鼠后，血清抗體水平均顯著高于陰性對(duì)照組，明顯誘導(dǎo)了機(jī)體的體液免疫應(yīng)答。由淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)表明：C組內(nèi)的實(shí)驗(yàn)組OD值／對(duì)照組OD值明顯高于A組、B組、D組。說(shuō)明小鼠免疫甘露糖修飾化的布魯氏菌外膜蛋白在二免lOd后，T淋巴細(xì)胞增殖能力明顯高于免疫布魯氏菌S2商品疫苗、純化的布魯氏菌兩種混合外膜蛋白與P
5、BS對(duì)照組。表明甘露糖修飾化的布魯氏菌外膜蛋白在誘導(dǎo)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答發(fā)揮了作用。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)蛋白質(zhì)經(jīng)糖基化修飾后有顯著免疫效果。疫苗佐劑的選擇直接影響著疫苗的免疫效果，為了使疫苗的效果達(dá)到最佳，選擇了法國(guó)賽比克公司的四種佐劑MontanideISA71VG、ESSAIISA206CEL、MontanideIMS251CVG和MontanideGel01PR，利用糖基化布魯氏菌OMPs制作了四種不同佐劑的疫苗。由正交試驗(yàn)篩選布魯氏菌外膜蛋白的配合佐劑，最佳免疫程序。結(jié)果顯原使用MontanideIMS251CVG納米顆粒佐劑，免疫劑量為甘露
6、糖基化修飾氏菌外膜蛋白Xigg，采取肌內(nèi)注射，免疫三次這種組合，無(wú)論是在抗體產(chǎn)生是血清IFN吖產(chǎn)生水平為最佳組合。全隨機(jī)試驗(yàn)、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)進(jìn)一步檢驗(yàn)靶向化布魯氏菌樹(shù)突狀細(xì)胞疫效果，結(jié)果表明靶向化疫苗誘導(dǎo)了機(jī)體較強(qiáng)的免疫應(yīng)答。安全性試驗(yàn)結(jié)果表明：布魯氏菌外膜蛋白樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗對(duì)6～8周齡BALB／c健康小鼠、妊娠小鼠均研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基于疫苗研究策略，有效預(yù)防布魯氏病奠定了基礎(chǔ)。：布魯氏菌；樹(shù)突狀細(xì)胞；甘露糖受體；靶向化ResearchandDevelopmentofTargetedDendriticCells場(chǎng)ccineforBruce
7、llosisGraduatestudent：FuJing-liMajor：．PreventiveVeterinaryMedicineAdvisor：ProfessorWangJia-xinAblstractBrucellaisfacultativeintracellularbacteriathatcancauseabortioninpregnantcattleandundulantfeverinhumansinawiderangeofmammals，includingdomesticanimalsandhumans．Brucellainfect
8、sitshostthroughmucosaandwounds．Asfrequentlydescribed，whateverthespeciescons
