靶向mtor增敏順鉑對胃癌耐藥細胞株sgc79012fddp的作用

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1、徐州醫(yī)學院碩士學位論文靶向mTOR增敏順鉑對胃癌耐藥細胞株SGC7901／DDP的作用中文摘要目的靶向mTOR／p70S6K基因干擾增敏順鉑對胃癌耐藥細胞株SGC7901／DDP的作用，并探討其相關作用機制。方法胃癌SGC7901／DDP細胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清、500ng／ml順鉑(cisplatin，DDP)、100U／ml青霉素和100U／ml鏈霉素的RPMll640培養(yǎng)液中，1．給予轉染熒光標記siRNA(FAM．siRNA)6h后，熒光顯微鏡檢測篩選細胞轉染最佳濃度，以最佳濃度進行后

2、續(xù)實驗；p70S6K-siRNA轉染(40pmol／p1)、DDP(2．5mg／L)作用SGC790I／DDP細胞后：2．MTT法檢測各組細胞24h、48h、72h增殖情況；藥物作用細胞48h后：3．HE染色觀察各組細胞形態(tài)學變化；4．RT-PCR檢測各組細胞GST、MRPl、survivinmRNA的表達水平：5．免疫細胞化學染色及Western—blot檢測各組細胞中survivin、p-JNK、P—gP、MRPl蛋白的表達情況：6．檢測各組細胞內(nèi)GSH含量和GST活力。結果1．不同濃度熒光

3、標記的siRNA(siRNA朋旨質體(pmol／t．t1)：20，40，60，80組)轉染6h后均可成功轉入SGC7901／DDP細胞，在熒光顯微鏡下可見綠色熒光散在分布于各組細胞質中，其中40pmol／pl組轉染率最高(P<0．05)：2．2．5mg／LDDP單獨應用對SGC7901／DDP細胞增殖無抑制作用，與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(尸>0．05)。p70S6K．siRNA轉染SGC7901／DDP細胞后，細胞增殖受到不同程度抑制，與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P

4、DP作用，藥物對細胞增殖的抑制更明顯，與p70S6K．siRNA轉染組相比，差異均有統(tǒng)計!學意義(JP

5、有統(tǒng)計學意義(P0．05)；細胞經(jīng)p70S6K．siRNA轉染及轉染聯(lián)合DDP后，GST、survivin及MRPl的mRNA水平表達下降，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義(尸

6、／DDP細胞，各蛋白表達情況與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(胗0．05)；轉染、轉染聯(lián)合DDP后細胞中survivin、p-JNK、P—gP、MRPI蛋白的表達下降，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義(P

7、聯(lián)合順鉑具有協(xié)同作用，細胞對順鉑的敏感性增強。2．增敏順鉑對SGC7901／DDP作用的機制與mTOR／p70S6K／JNK通路下調(diào)P-gP、MRPl及GST以及mTOR／p70S6K／survivin通路下調(diào)survivn的表達有關。關鍵詞SGC7901／DDP細胞；siRNA；DDP；JNK；survivin；mTOR4徐州醫(yī)學院碩士學位論文SmallinterferenceRNAtargetingp70S6KenhancesthesensitivitytocisplatinofSGC790

8、1／DDPAbstractobjectiveToinvestigatetheeffectofmTOR／p70S6K。siRNAtransfectiontoenhancesthesensitivitytocisplatinofSGC7901／DDPandelucidatetheunderlyingmechanisms．MethodsInthisstudy,SGC7901／DDPcellswereculturedinRPMll640containing10％FBS，500ng／mlDDP,100U／