赤芝中麥角甾醇酯色譜分離和檢測方法地研究

赤芝中麥角甾醇酯色譜分離和檢測方法地研究

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1、摘要甾醇類化合物,特別是真菌的標志化合物麥角甾醇及其酯,作為真菌細胞膜的重要組成成分及其與真菌生物量之間的相關性,已引起人們的廣泛關注;同時,因麥角甾醇酯在真菌中的多樣性,使其有望成為真菌化學分類的標志化合物之一。因此,建立一種能快速、準確、高效的分離純化麥角甾醇酯,并對其酯鏈脂肪酸的組成進行定性和定量分析的方法顯得十分重要。本文以赤芝為例,采用薄層色譜和柱色譜方法,分離并純化出目標化合物麥角甾醇酯;而后比較了不同催化方式的衍生化處理效果,確定了最適宜的衍生化方式;最后采用氣相色譜.質譜(GC.MS)和氣相色譜-同位素比值質譜(oc.raMS)對赤芝中麥角甾醇酯和三酰甘油的酯鍵脂肪酸化

2、學和穩(wěn)定碳同位素組成進行了測定,獲得了如下創(chuàng)新性認識:l、本文建立了一種準確、快速分離純化真菌中麥角甾醇酯,并對其酯鍵脂肪酸組成進行定性和定量測定的方法;該新方法適用于研究真菌中麥角甾醇酯的化學組成,并可為真菌的化學分類提供強有力的分析技術支撐。此方法的實驗步驟和條件為:將赤芝子實體菌管部分切碎、干燥,碾碎約60目和120目粉末;以二氯甲烷:甲醇(8:1)為溶劑,用索氏法連續(xù)抽提72h;將提取物中的石油醚可溶部分用20%-"氯甲烷+80%石油醚作初始洗脫液,分離麥角甾醇酯和三酰甘油;在麥角甾醇酯中加入甲苯助溶,再加入1%硫酸甲醇溶液,于800C下加熱回流5h;取石油醚層進行GC.MS和

3、GC—IRMS分析。2、作者從赤芝的麥角甾醇酯中識別出16種酯鍵脂肪酸,其中棕櫚酸(C16:o)含量最高(56.42%),其次為油酸(C18:1A9e)(19.80%)和亞油酸(C18:2A9c,12c)(4.42%);從赤芝的.T.三酰甘油中識別出15種酯鍵脂肪酸,其中油酸(C18:lA9‘;)含量最多(61.26%),棕櫚酸(15.81%)和亞油酸(C1813.69%)次之;在麥角甾醇酯的酯鍵脂肪酸中,以飽和脂肪酸為主(Zsat=73.61%),而在三酰甘油酯的鍵脂肪酸中,以不飽和脂肪酸為主(Zunsat=77.71%)。赤芝中麥角甾醇酯的含量為0.45mc/g.3、赤芝子實體全粉

4、的613C值為一23.8‰—一23.6‰,指示其培養(yǎng)基為C3植物;赤芝中麥角甾醇酯和三酰甘油的主要酯鍵脂肪酸內部分別存在如下穩(wěn)定碳同位素分餾規(guī)律:Cls:o=C18:l△9。>C16:o≈LCl8:2A9c,12c及C18:o>C16:o=C18:l△9。=C?.A9c,12c;而麥角甾醇酯與三酰甘油中對應的主要酯鍵脂肪酸C16:o、C18:o和C18:2A9。,12。之間613C值明顯不同,但它們C18:1△9。的613C值基本一致。關鍵詞:色譜方法,麥角甾醇酯,赤芝ChromatographicMethodsfortheSeparationandDeterminationofErg

5、osterolEstersinGanodermalucidumMajor:BiotechnologySubmittedbyZHANGYahSupervisor:Prof.WANGJianghaiAbstractSteroidcompounds,inparticularergosterolsandtheirestersasfungalbiomarkers,whicharetheimportantcompositionofcellmembraneandrelatedtofungalbiomass,haveattractedagreatattention.Moreover,ergosrero

6、lesterisexpectedtobeoneofthebiomarkersforthechemicalchemotaxonomyoffungiduetoitsdiversity.Thus,itisquitesignificanttoestablisharapid,efficientandaccuratemethodtoseparateandpunfyergosterolesters,anddeterminethecompositionoffattyacidslinkedwithergoster01.TheauthorfocusedonGanodermalucidumasacasest

7、udy,firstlytodevelopamethodtoseparateandpurifythetargetcompoundergosterolesterviathin—layerchromatographyandcolumnchromatography,-thentochooseanappropriatetransesterification’methodviathecomparisonofdifferentcatalystmethods,

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