局部熱應(yīng)激預(yù)處理對肝臟缺血／再灌注損傷的防護作用的機制

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1、局部熱應(yīng)激預(yù)處理對肝臟缺血/再灌注損傷的防護作用的機制中國應(yīng)用牛理學(xué)雜志2005;21(3)局部熱應(yīng)激預(yù)處理對肝臟缺血/再灌注損傷的防護作用的機制秦麗娟，曹宇(1?中國醫(yī)科人學(xué)生理學(xué)教研室,i［寧沈陽110001;2內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院生理教研室，內(nèi)蒙古呼和浩特010059)285摘要目的:探討熱應(yīng)激預(yù)處理誘導(dǎo)產(chǎn)生的熱休克蛋白70對肝臟缺血/再灌注損傷的保護作用的機制?方法:應(yīng)用Dringle.s法制備肝臟缺血/再灌注損傷模型及熱應(yīng)激預(yù)處理模型.將實驗人鼠隨機分為熱應(yīng)激預(yù)處理(HP+I/R)組與非預(yù)處理(I/R)組,對比觀察兩組動物肝臟缺血/再灌注后0,4,&12,24h時肝臟HSP70的

2、表達,SOD活力和MDA的產(chǎn)生量及大鼠血清門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(aspartatetransaminase,AST),丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alaninetransaminase,ALT)的活性與肝臟病理組織學(xué)改變.結(jié)果:熱應(yīng)激預(yù)處理組各吋間點肝臟HSP70的表達及SOD的活力均比非預(yù)處理組同一時間點高.而血清AST,ALT酶活性及MDA的產(chǎn)生量較菲預(yù)處理組低,病理損傷也比非預(yù)處理組減輕.結(jié)論:熱應(yīng)激預(yù)處理誘導(dǎo)產(chǎn)生的熱休克蛋白70可能通過促進SOD的產(chǎn)生，從而降低氧自由基對肝臟的損害，起到保護肝臟缺血/再灌注損傷的作用.關(guān)鍵詞:HSP70;SOD;缺血/再灌注損傷;肝臟中圖分類號:R657.3文

3、獻標(biāo)識碼:A文章編號:1000—6834(2005)03—0285—04熱休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)是機體在受到應(yīng)激刺激時產(chǎn)生的一種內(nèi)源性保護性蛋口質(zhì)，能提高細(xì)胞耐受力11.HSP70在肝臟缺血/再灌注中的保護作用已被證實14,但其保護作用的確切機制至今尚不清起.本實驗制備了大鼠熱應(yīng)激預(yù)處理與非預(yù)處理動物模型，對比觀察了兩組動物肝臟缺血/再灌注后不同時間點肝臟HSP70的表達,SoD活力和MDA的產(chǎn)生量，血清AST,AUT活性及肝臟病理組織學(xué)改變，以探討熱應(yīng)激預(yù)處理誘導(dǎo)產(chǎn)生的HSP70對肝臟缺血/再灌注損傷的保護作用機制.1材料與方法1.1動物

4、及分組選用Wistar健康雄性大鼠50只(由屮國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供)，體重200?250g,隨機分為兩組(=25):熱應(yīng)激預(yù)處理(HP+I/R)組和非預(yù)處理⑴組.1.2模型的建立HP+I/R組:大鼠實驗前禁食12h,自由飲水，10%烏拉坦腹腔注射麻醉，于劍突下沿腹白線作約1CD1的切口暴露肝臟,將溫度傳感器探頭包埋于肝左外側(cè)葉下,外接二道生理記錄儀(LMS一2B型，成都儀器廠)描記肝臟溫度變化,用電吹風(fēng)對肝臟進行局部加熱約15min使肝臟溫度達(42±0.5)°C,維持15min后停止加熱，關(guān)閉腹腔?動物恢復(fù)12h后進行缺血/再灌注模型制備(模型制備同I/R組，見下述).I/

5、R組:動物飼育條件及手術(shù)過程同前，不進行局部加熱，只暴露肝臟30min后關(guān)閉腹腔.恢復(fù)12h后再次用10%烏拉坦腹腔注射麻醉，沿腹正中切口切開腹部,游離肝門韌帶，用無損傷血管夾夾閉肝蒂使肝臟缺血30min,去夾恢復(fù)血流進行再灌注.兩組動物分別于再灌注后0,4,&12,24h時取肝臟左外側(cè)葉于一70°C冰箱保存，準(zhǔn)備測定SOD活力和MDA含量;另取小塊肝左外側(cè)葉用10%中性福爾馬林固定，準(zhǔn)備測定HSP70表達;腹主動脈取血2ml,37°C恒溫水浴lh后,3000r/min離心5min,取血清于一70°C冰箱保存準(zhǔn)備測定血清酶活性.13血清酶活性測定釆集的血清在72h內(nèi)以全自動?；治?/p>

6、儀(7600型,FI本)測定血清AST,ALT的活性.1.4肝臟SOD活性,MDA含量的測定采用黃卩票嶺氧化酶法測定肝臟S0D活力;硫代巴比妥酸(TBA)法測定肝臟MDA含量?具體操作按照南京建成牛物工稈研究所提供的試劑盒說明進行.1.5肝臟HSP70表達的測定采用鏈霉親和素一生物素一酶復(fù)合物(SABC)法.抗大鼠HSP70抗體購自武漢博士德生物工程有限公司?陰性對照采用PBS代替一抗.1,6病理組織學(xué)觀察肝臟標(biāo)本用10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋,切片,HE染色,光鏡下觀察肝臟病理組織學(xué)改變?另取小塊肝臟用2.5%戊二醛固定,按透射電鏡要求制片，常規(guī)鉛鈾雙染色，電鏡下觀察肝臟

7、組織學(xué)改變.*基金項目:國家自然科學(xué)基金資助項目(30270198)收稿H期:2003.10—08;修回日期:2004—12—13作者筒介:秦麗娟(1975—)，女(蒙)，內(nèi)蒙古赤峰人，助教碩士從事環(huán)境生理及體溫生理研究?通訊作者1.7統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(土S)表示，采用Excel軟件進行方差分析,t檢驗.2結(jié)果2.1各組大鼠血清AST活性的變化I/R組與HP+I組血清AsT活性在缺血/再灌注后的0?24h觀察期間內(nèi)均隨缺血后再灌注時間的延長而升高，但HP+