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1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和基因槍法獲得轉(zhuǎn)BRi基因玉米材料姓名：李燕燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：孫慶泉20120614山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要基因工程和轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展，克服了傳統(tǒng)雜交育種方式的不足，為種質(zhì)資源的創(chuàng)新和作物品質(zhì)改良提供了新的思路和方法。農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和基因槍法是玉米遺傳轉(zhuǎn)化的主要方法。本試驗(yàn)采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和基因槍法對(duì)18-599、齊319、A188和昌7·2四個(gè)玉米自交系幼胚誘導(dǎo)的II型愈傷組織進(jìn)行了BRi基因的遺傳轉(zhuǎn)化。主要結(jié)果如下：1．玉米幼胚愈傷組織受體系統(tǒng)建立受基因型影響。四個(gè)供試玉米自交系18-599、齊
2、319、A188和昌7—2的幼胚都能誘導(dǎo)產(chǎn)生Il型愈傷組織。其中，18-599所獲愈傷組織質(zhì)量好數(shù)量多，適于轉(zhuǎn)化；齊319和昌7．2愈傷顆粒松散，質(zhì)地硬，愈傷質(zhì)量不高；A188愈傷組織呈白色，顆粒較松散，具有一定的數(shù)量。生根壯苗培養(yǎng)基中生根粉濃度為1．5mg·Ld時(shí)生根效果最好。2．浸染強(qiáng)度是影響農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化效率的重要因素之一。對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法浸染時(shí)間和菌液濃度的參數(shù)優(yōu)化研究表明，18．599的最佳浸染強(qiáng)度為OD600=0．6，10min，齊319的最佳浸染強(qiáng)度為OD600=0．4，20min。3．在基因槍轉(zhuǎn)化過(guò)程中，愈傷組織的預(yù)處理方式、鎢粉用量、質(zhì)粒濃度均對(duì)轉(zhuǎn)化率產(chǎn)生影響。
3、愈傷組織先干燥2h，再高滲處理2h的轉(zhuǎn)化率比單純高滲處理高；鎢粉濃度為100pg／槍時(shí)轉(zhuǎn)化率高且節(jié)省成本；質(zhì)粒濃度為1．5肛∥槍時(shí)的轉(zhuǎn)化率高。4．通過(guò)分子檢測(cè)證明已經(jīng)獲得陽(yáng)性轉(zhuǎn)化植株。在農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化株的PCR檢測(cè)中，94株A188轉(zhuǎn)化苗中有22株為陽(yáng)性植株，轉(zhuǎn)化率23．4％；208株18．599轉(zhuǎn)化苗中有26株為陽(yáng)性植株，轉(zhuǎn)化率為12．5％；20株齊319轉(zhuǎn)化苗中僅檢測(cè)到l株為陽(yáng)性，轉(zhuǎn)化率為5％；昌7．2未獲得陽(yáng)性植株。在基因槍轉(zhuǎn)化株的PCR檢測(cè)中，56株轉(zhuǎn)化苗中，18-59946株，有3株為陽(yáng)性植株，轉(zhuǎn)化率6．52％，轉(zhuǎn)化率較低。齊31910株，未獲得陽(yáng)性植株。經(jīng)RT．
4、PCR檢測(cè)，共得到8株RT．PCR陽(yáng)性植株；再經(jīng)Southernblotting驗(yàn)證，獲得了轉(zhuǎn)化植株。關(guān)鍵詞：玉米；受體系統(tǒng)；觥f：農(nóng)桿菌介導(dǎo)；基因槍轟擊；分子檢測(cè)利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和基因槍法獲得轉(zhuǎn)BRi基因玉米材料AbstractThedevelopmentofGeneticengineeringandtransgenictechnology,makesuptheweaknesssoftraditionalhybridbreedingwayandprovidesnewideasandmethodsfortheinnovationofthegermplasmresources
5、andcropqualityimprovement．Agrobacterium—mediatedtransformationandgenegunisthemaintwogenetictransformationmethods．ThistesttransformedBRigeneintotypeIIcallusderivedfromimmatureembryosoftheinbredlines18—599，Qi319，A188andchan97-2viaAgrobacterium--mediatedtransformationandgenegun．Theresultswere
6、asfollows：1．GenetictypeisthemainfactorinfluencingtheproductionoftypeIIcallus．Immatureembryosfromthefourselectedinbredlines18—599，Qi319，A188andchang7-2Canbeallinduced．Amongthem，thequalityof18-599inducedcallusWasgood，thenumberWaslarge，anditWassuitableforgenetictransformation；Theparticlesofca
7、llusderivedfromQi319andchan97—2Wasloose，thetexturewashard,andthecallusqualityisbad；A188calluswaswhite，particleloose，andhasacertainnumber．TheconcentrationofABTinmediumWasadjustedtO1．5mg·L-I，becauseinthisconditiontheroothadthemaximumnumberandtheaveragerootnumber
