農(nóng)桿菌介導(dǎo)的海島棉轉(zhuǎn)bt基因遺傳轉(zhuǎn)化研究

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1、＊分類(lèi)號(hào)：：Ｑ７８學(xué)校代碼１０７５８密級(jí)：公開(kāi)學(xué)號(hào)：１２３１０２００１１ｆ雜ｆ《寺乂＃．－治１碩古學(xué)位論文為艇Ｖ；－農(nóng)桿菌介導(dǎo)的海島楠轉(zhuǎn)餅基因逸傳轉(zhuǎn)化研究，Ｓｔｕｄｏｎｒｏｂａｃｒｉｕｍ－ｙＡｔｅｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓｍｅｄｉａｔｅｄｇＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆ巧／Ｇｅｎｅｉｎ化ＳｅａＩｓｌａｎｄＣｏｔｔｏｎ（Ｇｏ削少／７／Ｍ／ｗ４苗ｒｂａｄｅｎｓｅ－著ＢａＬ．／）研究生姓名Ｔ喜蓮導(dǎo)師姓名及職稱(chēng)陳全家教４受合作導(dǎo)師姓名及職稱(chēng)曲延英

2、教４蔓學(xué)位口類(lèi)紋別理學(xué)碩壬專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向棉花基因工程寺所在學(xué)院農(nóng)學(xué)院＇．，？，．、－■．＂？烏魯木齊－新疆’二０—五年六月％＾‘＾、‘．＾７．缸作？茲；巧ｒ讀衝，句趙篇獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研巧工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加示往和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研巧成果，也不包含為獲得新疆農(nóng)業(yè)大一學(xué)或其他教育單位的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我同工作的同志對(duì)

3、本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研巧生簽名：了時(shí)間：Ｗ年《月巧曰關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說(shuō)明本人完全了解新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，目日：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子文’檔，可Ｗ采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)巧檢索，可公布（包括刊登）論文的全部或部分內(nèi)容。（保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議）於！奸（月曰研究生簽名：了時(shí)間：導(dǎo)師簽名

4、：時(shí)間：從晚（月曰本文是轉(zhuǎn)基因生物新品種重大專(zhuān)項(xiàng)課題的部分研究成果（項(xiàng)目編號(hào)：2013ZX008005-008）課題主持人：曲延英（新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)）農(nóng)桿菌介導(dǎo)的海島棉轉(zhuǎn)Bt基因遺傳轉(zhuǎn)化研究摘要本研究首先以海島棉D(zhuǎn)J-1（373）、天長(zhǎng)2號(hào)（376）、5917（380）、阿長(zhǎng)-599（381）、塔07-152（383）、S0717（408）6個(gè)品系的下胚軸為外植體，建立了一個(gè)通用的海島棉再生體系；并在此基礎(chǔ)上以新海14號(hào)和新海33號(hào)為材料，對(duì)海島棉轉(zhuǎn)Bt基因遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行優(yōu)化研究，對(duì)獲得的轉(zhuǎn)基因植株采用嫁接的方法以提高定植成活率；對(duì)獲得的10株轉(zhuǎn)基因

5、植株進(jìn)行分子檢測(cè)，初步確定Bt基因已整合到兩個(gè)海島棉品種的基因組中。結(jié)果如下：以6個(gè)海島棉品系的下胚軸為外植體，通過(guò)雙因素隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)的方法篩選出的兩組最佳激素組合，誘導(dǎo)出愈傷組織，并成功獲得再生植株。研究結(jié)果表明：在愈傷組織分化培養(yǎng)基中加入0.1mg/L2,4-D和0.1mg/LKT，海島棉380、383和381的出愈率最高且狀態(tài)較好，在愈傷組織分化培養(yǎng)基中加入0.3mg/LNAA和0.1mg/LKT，海島棉373、376和408可獲得高質(zhì)量的愈傷組織；將新挑出的初生性胚性愈傷組織與已獲得的其他品系的胚性愈傷接種到同一個(gè)培養(yǎng)瓶中，可提高此棉花品系的胚

6、性愈傷組織出愈率；將其接種于含有0.1mg/LKT和0.05mg/LIBA的培養(yǎng)基中可促進(jìn)體細(xì)胞胚胎的發(fā)生和成熟，利用畸形苗的培育可提高體細(xì)胞胚胎和再生植株的發(fā)生率，6個(gè)品種在6-8個(gè)月內(nèi)均能獲得再生植株，建立了一個(gè)通用的海島棉再生體系，在一定程度上打破了基因型的限制。以新海14號(hào)和新海33號(hào)為研究材料，對(duì)海島棉轉(zhuǎn)Bt基因遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行優(yōu)化研究，獲得轉(zhuǎn)基因植株。研究結(jié)果表明：預(yù)培養(yǎng)10d左右的胚性愈傷組織用農(nóng)桿菌侵染15min，共培養(yǎng)24h后，轉(zhuǎn)入抗生素篩選培養(yǎng)基（50mg/L卡那霉素+500mg/L頭孢霉素），挑選出抗性胚性愈傷組織。在抗性體細(xì)胞胚

7、胎分化培養(yǎng)基中調(diào)節(jié)硝酸鹽濃度，添加3.8g/LKNO3和0.55g/LNH4NO3有利于體細(xì)胞胚胎的成熟，在很大程度上提高體細(xì)胞胚的發(fā)生率；在成苗培養(yǎng)基中將MS大量減半，有利于正常轉(zhuǎn)基因苗的萌發(fā)和發(fā)育，降低畸形胚的發(fā)生率。對(duì)嫁接成活后的轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行PCR分子檢測(cè)和GUS組織化學(xué)檢測(cè)，初步確定外源Bt基因穩(wěn)定存在于轉(zhuǎn)化體基因組中，獲得的10個(gè)轉(zhuǎn)基因植株均為陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因植株。關(guān)鍵詞：海島棉；再生體系；植物激素；Bt基因；遺傳轉(zhuǎn)化IStudyontheAgrobacteriumtumefaciens-mediatedTransformationofBtGen

8、eintoSeaIslandCotton(GossypiumBarbadenseL.)Abst