bfgf通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路對大鼠急性脊髓損傷早期保護作用機制的研究

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1、溫州醫(yī)學院碩士學位論文bFGF通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路對大鼠急性脊髓損傷早期保護作用機制的研究姓名：張謝申請學位級別：碩士專業(yè)：藥理學指導教師：李校堃；肖?。粡埡暧?012-05-22溫州醫(yī)學院碩士學位論文bFGF通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路對大鼠急性脊髓損傷早期保護作用機制的研究中文摘要第一部分：大鼠急性脊髓損傷早期內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)信號通路相關(guān)蛋白的表達目的：觀察大鼠急性脊髓損傷早期，脊髓損傷處ERS信號通路相關(guān)蛋白GRP78、CHOP／GADDl53、Caspasel2的表達變化，探討大鼠急性脊髓損傷早期ERS與細胞凋亡的關(guān)系。方法：用動脈血

2、管夾(309，2min)壓迫脊髓法來制作SD大鼠急性脊髓損傷動物模型。36只雌性SD大鼠，隨機分為假手術(shù)組與模型組，按照不同時問點又分為ld，3d，7d三組，采用BBB法對其后肢運動功能進行評分，并于相應(yīng)點處死，收集脊髓損傷節(jié)段作為組織標本。采用HE染色法觀察損傷脊髓細胞形態(tài)變化，用免疫組化法以及westernblot法來檢測脊髓組織中GRP78、CHOP／GADDl53、CaSpaLsel2蛋白的表達，用TUNEL法檢測細胞凋亡。結(jié)果：1、BBB評分：假手術(shù)組大鼠下肢行動正常，而模型組出現(xiàn)不同程度的下肢功能障礙，術(shù)后1d與3d下肢癱瘓程度無

3、顯著性差異，7d后有所好轉(zhuǎn)(p<0．05)。2、HE染色發(fā)現(xiàn)各組脊髓損傷節(jié)段出現(xiàn)不同程度的細胞腫脹、凋亡和壞死。3、免疫組化與westernblot結(jié)果顯示模型組GRP78、CHOP／GADDl53、Caspasel2蛋白在各個時間表達均明顯高于假手術(shù)組(p<0．05)，且模型組內(nèi)這些蛋白表達在1d就有所增加，3d達到高峰，7d又逐漸減少(p

4、脊髓損傷節(jié)段表達增加，促進細胞凋亡。4溫州醫(yī)學院碩士學位論文第二部分bFGF抑制ERS信號途徑保護早期大鼠急性脊髓損傷作用是通過ERKl／2，AKT途徑介導目的：研究堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)對ERS的PCI2細胞的保護作用機制以及對大鼠急性脊髓損傷后促進大鼠后肢功能恢復作用機制。方法：1、用lnmol／ml毒胡蘿卜素(TG)誘導PCI2細胞建立ERS損傷模型，用40ng／mlbFGF進行藥物干預，流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率，westernblot法檢測p-ERKl／2，p-AKTl／2／3，p-GSK313以及CHOP／GADDl

5、53表達變化。2、54只SD雌性大鼠隨機分為假手術(shù)組(Sham)、脊髓損傷生理鹽水對照組(SCI)、脊髓損傷bFGF治療組(SCI+bFGF)，按不同的時間點分1d，3d，7d三個組。采用BBB法對其后肢運動功能進行評分，獲得的損傷脊髓節(jié)段組織標本進行HE染色觀察各組脊髓損傷組織學變化，免疫組化法檢測脊髓組織中ERS相關(guān)蛋白GRP78、CHOP／GADDl53、Caspasel2表達，用westemblot法來檢測GRP78、CHOP／GADDl53、Caspasel2、P-ERKl／2，p-AKTl／2／3，p-GSK313以及神經(jīng)保護因子

6、GAP．43、Stathmin蛋白表達變化。結(jié)果：1、流式圖結(jié)果顯示用TG處理過的PCI2細胞，用bFGF處理后，細胞凋亡率明顯下降。2、Westernblot結(jié)果顯示，用TG處理過PCI2細胞，P．ERKl／2，P．AKTl／2／3，p-GSK3p表達明顯降低(p<0．05)，而CHOP／GADDl53表達明顯升高(p

7、行干預，P．ERKl／2，p-AKTl／2／3表達明顯減少(p<0．01)，而CHOP／GADDl53表達又升高(p<0．05)。3、BBB評分動物組后肢功能恢復情況，從術(shù)后3d開始SCI+bFGF組明顯高于SCI組(p<0．05)。4、術(shù)后7d動物組織片HE染色觀察發(fā)現(xiàn)SCI+bFGF組脊髓組織結(jié)構(gòu)明顯比SCI組致密。5、術(shù)后7d免疫組化顯示SCI+bFGF組ERS相關(guān)蛋白GRP78、CHOP／GADDl53、Caspasel2表達相比SCI組明顯下降(p<0．05)；westernblot檢測術(shù)后1d，3d，7d上述蛋白得到一致的結(jié)果，即

8、SCI+bFGF組相比SCI組表達量明顯下降(p