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《同時(shí)檢測(cè)美洲型及歐洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒多重rt-pcr方法的建立與應(yīng)用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文同時(shí)檢測(cè)美洲型及歐洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒多重RT--PCR方法的建立與應(yīng)用姓名：趙日浪申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：鐘誠(chéng)20120628同時(shí)檢測(cè)美洲型及歐洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒多重RT-PCR方法的建立與應(yīng)用’摘要為了建立豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)的快速鑒別檢測(cè)方法，本研究針對(duì)PRRSV的基因序列設(shè)計(jì)并合成3對(duì)特異性引物，分別為CO—ORF7、EU-ORF5和AM-Nsp2：利用CO．ORF7擴(kuò)增美洲型和歐洲型毒株ORF7基因433bp／398bp片段；利用AM—Ns
2、p2擴(kuò)增美洲型經(jīng)典毒株和變異毒株Nsp2基因338bp／248bp片段；利用EU—ORF5擴(kuò)增歐洲型毒株ORF5基因614bp片段。經(jīng)過(guò)反應(yīng)條件的優(yōu)化，成功建立了能同時(shí)檢測(cè)并區(qū)分美洲型經(jīng)典毒株、高致病性變異毒株以及歐洲型毒株的多重RT-PCR檢測(cè)方法。該方法可以特異擴(kuò)增PRRSV對(duì)應(yīng)的基因片段，而與豬瘟病毒(CSFV)、豬口蹄疫病毒(F加V)、豬偽狂犬病病毒(PRV)、豬細(xì)小病毒(PPV)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)均無(wú)交叉反應(yīng)；對(duì)重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的檢出下限為1．67×103拷貝／此；在相同條件下進(jìn)行的重復(fù)試驗(yàn)可獲得均勻
3、一致的結(jié)果。應(yīng)用檢測(cè)PRRSV的多重RT-PCR方法對(duì)臨床采集的176份疑似病料進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果PRRSV陽(yáng)性45份，其中美洲型變異毒株41份、經(jīng)典毒株4份，未檢測(cè)到歐洲型毒株。針對(duì)臨床上PRRSV和CSFV混合感染時(shí)有發(fā)生的情況，為建立能同時(shí)檢測(cè)CSFV和PRRSV的方法，針對(duì)CSFV和PRRSV的基因序列設(shè)計(jì)3對(duì)特異性引物，即CSF-NS2、AM-Nsp2、EU-ORF5。其中，CSF-NS2擴(kuò)增CSF毒株NS2基因508bp片段，AM-Nsp2擴(kuò)增PRRS美洲型經(jīng)典毒株和變異毒株Nsp2基因338bp／248bp片
4、段，EU-ORF5擴(kuò)增PRRS歐洲型毒株ORF5基因614bp片段。經(jīng)過(guò)反應(yīng)條件的優(yōu)化，建立了能同時(shí)檢測(cè)并區(qū)分CSF毒株和PRRS美洲型經(jīng)典毒株、變異毒株及歐洲型毒株的多重RT-PCR方法。該方法可以特異擴(kuò)增CSFV和PRRSV，而與FMDV、PRV、PPV、PCV2均無(wú)交叉反應(yīng)；對(duì)CSFV和PRRSV4種重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的檢出下限均為1．67x103拷貝／止。應(yīng)用該方法對(duì)采集的106份臨床疑似病料進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果CSFV和PRRSV變異株混合陽(yáng)性4份，占3．77％(4／106)；CSFV陽(yáng)性7份，占6．60％(7／106
5、)；PRRSV變異株陽(yáng)性17份，占16．04％(17／106)。本研究成功建立了的兩種檢測(cè)PRRSV的多重RT-PCR方法，一是同時(shí)檢測(cè)美洲型及歐洲型PRRSV的多重RT-PCR方法，二是同時(shí)檢測(cè)CSFV及美洲型、歐洲型PRRSV的多重RT-PCR方法，為PRRSV和CSFV的臨床快速鑒別檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查提供了有效的技術(shù)平臺(tái)。關(guān)鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征病毒；美洲型毒株；歐洲型毒株；豬瘟病毒；多重RT-PCR；檢測(cè)方法EstablishmentandapplicationofamultiplexRT-PCRassayf
6、orsimultaneousdetectionoftheNorthAmericangenotypeandtheEuropeangenotypeofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus(PRRSV)ABSTRACTAbstract：InordertoestablishoneassaytosimultaneousanddifferentialdetectionoftheNorthAmerican(NA)genotypeandtheEuropean(E∽genotype
7、ofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus(PRRSV)，threepairsofspecificprimersweredesigned．neywerenamedasCO—ORF7，EU-ORF5andAM-Nsp2，respectively,ofwhichCO—ORF7specificallyamplified433bp／398bpORF7genefragmentoftheNAgenotypeandtheEUgenotype，AM-Nsp2specifically
8、amplified338bpor248bpNsp2genefragmentoftheclassicalstrainorthehighlypathogenic(uP)variantoftheNAgenotype，andEU—ORF5specificallyamplified614bpORF5genefragmentoftheEUge
