水稻灌漿初期高溫脅迫下的籽粒全長cdna文庫構建

水稻灌漿初期高溫脅迫下的籽粒全長cdna文庫構建

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頁數:43頁

時間:2019-02-19

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1、獨創(chuàng)性聲明本人聲明,所呈交的學位論文,是在指導教師指導下,通過我的努力取得的成果,并且是自己撰寫的。盡我所知,除了文中作了標注和致謝中已經作了答謝的地方外,論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含在江西農業(yè)大學或其它教育機構獲得學位或證書而使用過的材料。與我一同對本研究做出貢獻的同志,都在論文中作了明確的說明并表示了謝意。如被查有嚴重侵犯他人知識產權的行為,由本人承擔應有的責任。學位論文作者親筆簽名論文使用授權的說明本人完全了解江西農業(yè)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定,即學校有權送交論文的

2、復印件,允許論文被查閱和借閱:學??梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨热荩梢圆捎糜坝?、縮印或其他復制手段保存論文。保密,在——年后解密可適用本授權書??诓槐C?,本學位論文屬于不保密。彳(請在方框內打“√”)學位論文作者親筆簽名指導教師親筆簽日期:遜∑摘要前期研究中,本課題組采用基因差異顯示技術和比較蛋白質組學方法獲得了與水稻灌漿期應答高溫熱害有關的54個差異表達基因片段和21個差異表達蛋白,但是54差異表達基因片段和21個差異表達蛋白并非mRNA全長,為獲得mRNA全長構建水稻灌漿初期高溫脅迫下的籽粒全長e

3、DNA文庫。本文以高溫脅迫條件和常溫對照條件下的水稻籽?;旌蠘悠罚肅lontech公司生產的SMARTPCReDNASynthesisKit反轉試劑盒合成雙鏈eDNA;通過分段回收和純化eDNA后,克隆到T載體并轉化大腸桿菌DH5a;通過單克隆挑取和培養(yǎng),獲得了7974個陽性克隆,其中插入目的eDNA片段大于1.0kb的克隆有5074個,占克隆總數的63.6%;插入目的片段小于1.0kb的克隆數為2900個、占克隆總數的36.4%。隨機挑取其中34個克隆進行測序,測序結果在Genbank的水稻E

4、ST數據庫比對,結果顯示插入目的片段大于1.0kb的克隆中,75%為水稻EST數據庫中最長的eDNA;同時,比對結果顯示,基因OsP0003和OsP0012與籽粒育性相關的ESTs高度同源,基因0妒DD舛、OsP0023、OsP0029和OsP0032與干旱脅迫相關的ESTs。從文庫克隆的數量和測序及比對結果可以看出,本文所建文庫包含水稻中絕大多數基因表達的eDNA信息,文庫質量較好,為進一步獲得與水稻灌漿期耐熱性相關的差異表達基因和編碼差異表達蛋白基因的EST全長奠定了良好的基礎。關鍵詞:水稻;灌

5、漿初期;高溫脅迫;籽粒;全長eDNA文庫AbstractIn011I"previousstudy,54differentexpressinggenefragmentsand21differentdisplayingfunctionalproteinswereidentifiedbycDNA-AFLPgenesdifferentexpressingtechnologyandproteomics,respectively,however,the54differentdisplaygenesand21di

6、fferentdisplayingfunctionalproteinswerenotfulllengthmRNA,InordertogetfullthelengthmRNA,Full-lengthcDNAlibraryconstructionofricepanicleatearlymilkystageunderhightemperaturestress.Thus,inthisstudy,fulllengthcDNAsweresynthesizedbytheSMARTPCRcDNASynthesisK

7、itproducedbyClontechcompany,withthemixedpaniclesofriceunderhightemperaturestressandnormalculturalconditions.Afterrecoveryandpureinsections,fulllengthcDNAwereligatedtoTvectorandtransferredtoDH5a,and7974positivecloneswereobtained.Amongtheclones,thesizeof

8、targetcDNAupto1.0kbwere5074clones,accountto63.6%,andthesizeoftargetcDNAdownto1.0kbwere2900clones,accountto36.4%.Randomlyselected34clonesweresequenced,sequencingresultsinaGenbankESTdatabaseonrice.Accordingtotheresultofrandomsequencingand

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