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《大葉藻(zostera marina l.)愈傷組織體系的建立及優(yōu)化》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、中國海洋大學碩士學位論文大葉藻（ZosteramarinaL.）愈傷組織體系的建立及優(yōu)化姓名：吳茜申請學位級別：碩士專業(yè)：水產養(yǎng)殖指導教師：宮慶禮20120601摘要本論文以海洋鹽生被子植物大葉藻為研究對象，以組織培養(yǎng)技術原理為指導，以大葉藻初生分生組織和器官為外植體，探究培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)基添加物、培養(yǎng)方式、培養(yǎng)條件等對大葉藻不同外植體誘導愈傷組織的影響，探討大葉藻愈傷組織誘導的優(yōu)化條件，為通過大葉藻愈傷組織誘導體細胞胚間接發(fā)生和植株再生提供充足的種質來源，為人工條件下實現(xiàn)大葉藻規(guī)?；M織培養(yǎng)快繁體系做基礎技術參考；實驗結果如下：1．以大葉藻初生分生組織為外植體誘導愈傷組織(1
2、)無菌苗的培育及培育條件的優(yōu)化本實驗研究培養(yǎng)基鹽度(5‰、10‰、．15‰、20‰、25‰和30％o)、培養(yǎng)溫度(10℃、14℃、18℃、22℃和26℃)和培養(yǎng)光照強度(0Lx、500Lx、1000Lx、2000Lx和4000LX)對大葉藻種子萌發(fā)的影響，為組織培養(yǎng)提供充足的無菌外植體來源。優(yōu)化實驗結果表明，培養(yǎng)液為低鹽時(鹽度為5‰一10‰)時，有利于大葉藻種子在短時間萌發(fā)；而溫度為14℃時，種子的萌發(fā)率明顯高于其他溫度下的萌發(fā)率；光照強度對大葉藻種子萌發(fā)率影響不明顯，高光強(4000LX)不利于種子萌發(fā)。綜上所示：培養(yǎng)液鹽度為5％o．10‰，在溫度為14℃光強為500Lx．
3、1000Lx時可以為組織培養(yǎng)提供充足的無菌外植體供應。(2)以無菌苗為外植體進行愈傷組織的誘導①培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)方式對不同部位的外植體愈傷組織誘導的影響本實驗研究培養(yǎng)基種類(MS，N6，PESI，VSE和Sea培養(yǎng)基)、培養(yǎng)方式(固體培養(yǎng)、半固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng))對不同部位的外植體(胚根、胚軸和葉)愈傷組織誘導的影響，為大葉藻無菌苗愈傷組織誘導提供基礎的理論指導。實驗結果表明：半固體MS，N6，PESl，VSE和Sea培養(yǎng)基不利于無菌苗愈傷組織的誘導，只有液體N6可以促進無菌苗的胚根形成少量渾濁的淺綠色絲狀物，染色后發(fā)現(xiàn)綠色物質中含有大量細菌或真菌和少量染色淺的空泡狀細胞；而五種
4、固體培養(yǎng)基均可以促進無菌苗形成愈傷組織。其中，MS、N6和Sea培養(yǎng)基不利于愈傷組織的形成，愈傷組織誘導率低且含有大量的細菌或真菌：而VSE和PESI培養(yǎng)基有利于無菌苗的胚根形成愈傷組織，組織中含有少量的細胞和極少量的細菌，而葉和胚軸形成的愈傷組織中含有極少量的細胞。綜上所述：無菌苗的胚根可以在添加激素和碳源的固體VSE培養(yǎng)基上形成高誘導率的愈傷組織，組織中含有少量的細胞和極少量的細菌。②培養(yǎng)基添加物對大葉藻愈傷組織誘導的影響本實驗研究植物生長調節(jié)劑的種類(生長素2，4．D、NAA和lAA與細胞分裂素6．BA和KT配比)，植物生長調節(jié)劑的濃度(不同濃度的2，4．D和6．BA)，
5、碳源種類(蔗糖、葡萄糖、甘露醇和甘油)、碳源濃度(10g／L、20g幾、30∥L、40g／L和509／L)和瓊脂含量(O％、0．1％、0．4％、0．7％、1．0％和1．3％w／V)對大葉藻愈傷組織形成的影響，以提高愈傷組織的誘導率和愈傷組織的質量。實驗結果表明：vSE培養(yǎng)基中添加2，4．D和6．BA有利于大葉藻無菌苗愈傷組織的誘導，激素濃度對愈傷組織的誘導影響不顯著；蔗糖，甘露醇和甘油均有利于大葉藻愈傷組織的誘導，誘導率差異不顯著，但是蔗糖有利于外植體形成具有大量染色深細胞的綠色愈傷組織：蔗糖的濃度對大葉藻愈傷組織的形成影響差異不顯著，但蔗糖濃度過高(40g／L一50∥L)時，
6、愈傷組織干癟無光澤；培養(yǎng)基中添加0．4％．1．3％的瓊脂均有利于大葉藻愈傷組織的形成，含量為0．7％時愈傷組織誘導率最高(93．33％)，瓊脂含量過高(1．0％一1．3％)時愈傷組織干癟無光澤。綜上所述，培養(yǎng)基中添加2m∥L2，4一D、1m∥L6一BA、30∥L蔗糖和0．7％(WⅣ)的瓊脂有利于形成高誘導率的愈傷組織，且愈傷組織中含有大量染色深的細胞和極少量的細菌。③培養(yǎng)條件對大葉藻愈傷組織誘導的影響本實驗研究培養(yǎng)溫度(10℃、15℃、20℃、25℃和30℃)和光照強度(500Lx、1000Lx、2000Lx、4000Lx和80Q0Lx)對大葉藻愈傷組織形成的影響，以提高愈傷組
7、織的誘導率和愈傷組織的質量。實驗結果表明：培養(yǎng)溫度為10℃一30℃時均可以誘導無菌苗的胚根形成愈傷組織，當溫度為20℃時，愈傷組織的誘導率最高，為80％，與其他組差異性不顯著(尸>0．05)；高溫(25℃一30℃)條件下形成的愈傷組織干癟無光澤；當培養(yǎng)光照強度為500LX．8000Lx時均可以誘導胚根形成愈傷組織；其中當光照強度為500LX時愈傷組織誘導率最高，為86．67％，與其他實驗組差異不顯著(扮0．05)。光照強度為4000Lx．8000Lx時，愈傷組織干癟無光澤。綜上所述，當溫度為
