lps誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化過程中pim-1表達(dá)及調(diào)控通路的研究

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1、中圖分類號—咝萬方數(shù)據(jù)UDC61O碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼密級10533LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化過程中Pim．1表達(dá)及調(diào)控通路的研究ExpressionofPim--1andrelatedregulatingsignalingpathwaysinLPS-inducedactivatedmacrophage作者姓名：肖明亞學(xué)科專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)研究方向：內(nèi)科學(xué)學(xué)校(系、所)：湘雅醫(yī)院指導(dǎo)老師：徐美華副教授論文答辯日期矽·啦艾力z答辯委員會主席中南大學(xué)湘雅醫(yī)院二0一四年五月萬方數(shù)據(jù)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明lIllllllltlllMIILll

2、lllllllklllllllllllUlllllIY2685695本人鄭重聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。作者簽名：二盈坐學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者和指導(dǎo)教師完全了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)

3、定：即學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版；本人允許本學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢詫⒈緦W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密論文待解密后適應(yīng)本聲明。作者簽名：導(dǎo)師簽名：萬方數(shù)據(jù)本文章受以基金項目資助：★國家自然科學(xué)基金青年基金項目(項目批準(zhǔn)號：81200277)★湖南省衛(wèi)生廳科研基金課題(項目批準(zhǔn)號B2012．133)萬方數(shù)據(jù)LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化過程中Pim．1表達(dá)及調(diào)控通路的研究摘要目的：探討LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化過程中，Pim

4、．1的動態(tài)表達(dá)情況及抑制P13K、P38MAPK、MEKl／2、JAK2信號關(guān)鍵分子對巨噬細(xì)胞中Pim一1表達(dá)的影響。方法：分離培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，隨機分為7組，各組分別用11．tg／mlH匕多糖(LPS)處理Oh，lh，2h，4h，8h，12h，24h，禾lJmq．RTPCR、Westernblot技術(shù)檢測各組巨噬細(xì)胞中Pim—lmRNA及Pim．1蛋白的動態(tài)表達(dá)情況。分離培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，隨機分為6組，各組分別用LPS，DMSO+LPS，LY294002(P13K抑制劑)+LPS，SB203580(P38MAPK

5、抑帶0劑)+LPS，AG490(MEKl／2抑帶0劑)+LPS，U0126(JAK2抑制劑)+LPS處理細(xì)胞，利用Westemblot技術(shù)檢測各特異性信號分子抑制劑對LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中Pim．1蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果：①LPS,IJ激能迅速上調(diào)巨噬細(xì)胞中Pim．1mRNA水平，LPS刺激1h后即可檢測到Pim．1mRNA表達(dá)增高，Pim．1mRNA高峰在LPS刺激2h出現(xiàn)，約是對照組的6倍，LPS束U激12h后Pim．1mIⅢA即回落至基礎(chǔ)水平。(g)LPS束IJ激能迅速上調(diào)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中Pim．1蛋白的表達(dá)，LPS

6、束IJ激1h后即可檢測到Pim一1蛋白表達(dá)增高；Pim一1蛋白水平在LPS束IJ激1．8h后維持增高水平，LPS束U激12h后Pim一1蛋白水平即回落至基礎(chǔ)水平。@P13K抑制劑，P38MAPK抑制劑，MEKl／2抑制劑，III萬方數(shù)據(jù)JAK2抑制劑分別下調(diào)巨噬細(xì)胞中p．AKT，p-P38，p-ERK，p-JAK2的表達(dá)，P13K、P38MAPK、MEKl／2、JAK特異性抑制劑均能下調(diào)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中Pim．1蛋白表達(dá)水平。結(jié)論：①巨噬細(xì)胞中Pim．1mRNA及蛋白在LPS束[J激后迅速表達(dá)上調(diào)，體現(xiàn)Pim．1早期

7、即刻基因的特性。Pim．1在巨噬細(xì)胞早期活化過程中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。(④P13KJAKT、P38MAPK、MEK／ERK、JAK2／STATs信號通路均參與調(diào)控巨噬細(xì)胞中Pim．1的表達(dá)?！娟P(guān)鍵字]Pim．1；巨噬細(xì)胞；炎癥反應(yīng)；P13K；P38MAPK：JAK：MEKl／2萬方數(shù)據(jù)ExpressionofPim-landrelatedreglatingsignalingpathwaysinLPS·-inducedactivatedmacrophageAbstractAIMS：Theaimsofthisstudyweretoe

8、xploretheexpressionofPim一1kinaseduringtheactivateprogressionofmacrophageandtoassesswhetherinfluencefourkeysignalingmolecules(P13K，P38MAPK，MEKl／2，JAK2)ma