廣西巴馬小型豬生長軸關(guān)鍵基因研究

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1、廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文廣西巴馬小型豬生長軸關(guān)鍵基因研究姓名：吳丹申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：蔣和生；蘭干球；郭亞芬；蔣欽楊20120628廣西巴馬小型豬生長軸關(guān)鍵基因研究摘要動物生長發(fā)育是一系列復(fù)雜而精細(xì)的生物代謝過程，遺傳基因和激素調(diào)節(jié)對其產(chǎn)生重要影響。生長調(diào)控系統(tǒng)中，各因素對生長的調(diào)節(jié)主要是通過生長激素軸(GH．IGF軸)實(shí)現(xiàn)的。為探討廣西巴馬小型豬矮小性狀形成的分子機(jī)理，本試驗(yàn)對廣西巴馬小型豬生長軸上幾個關(guān)鍵基因多態(tài)性和表達(dá)規(guī)律進(jìn)行了系統(tǒng)研究，試驗(yàn)結(jié)果表明：1：不同日齡巴馬小型豬血清GHR與IGF．I的濃度檢測。分別采

2、集廣西巴馬小型豬和長白豬1日齡、30日齡、180日齡血液樣本，應(yīng)用Elisa方法檢測血清中GHR與IGF．I的濃度，結(jié)果表明：兩個豬種GHR和IGF．1血清質(zhì)量濃度均呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢。長白豬GHR及IGF．I血清質(zhì)量濃度顯著高于廣西巴馬小型豬，其中GHR分別為小型豬的7．94、4．82和1．89倍，IGF．1分別為小型豬的2．9l、1．73和1．24倍。2：巴馬小型豬生長軸關(guān)鍵基因多態(tài)性研究：應(yīng)用高分辨熔解曲線方法(HI蝴)檢測分析了廣西巴馬小型豬和長白豬SS、GH、J燦Q、IGF．I基因的多態(tài)性位點(diǎn)。結(jié)果顯示：(1)4個檢測基因在廣西巴馬

3、小型豬群體內(nèi)均無多態(tài)性。長白豬的SS，GH及JAK2基因分別存在有2、l和2個SNP位點(diǎn)。(2)廣西巴馬小型豬和長白豬相比，SS基因2個位點(diǎn)與GH基因1個位點(diǎn)的基因型頻率差異極顯著(P

4、錯義突變。3：克隆獲得廣西巴馬小型豬和長白豬GHR基因：其編碼區(qū)長1917bp，包含638個氨基酸殘基。序列分析表明：廣西巴馬小型豬GHR基因與長白豬同源性為99．6％，cDNA序列共有6個氨基酸位點(diǎn)的差異：其中1309V位于酪氨酸激酶結(jié)合域；C390Y、S527N及D561N位于GHBP結(jié)合區(qū)；K205R、A217V在胞外域。蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果顯示，K205R、A217V的突變對相應(yīng)位置的結(jié)構(gòu)未產(chǎn)生影響，但72～79位氨基酸肽段出現(xiàn)一定的分離。成功構(gòu)建了廣西巴馬小型豬及長白豬GHR基因pEGFP．C1真核表達(dá)載體，為進(jìn)一步研究GHR對矮小性

5、狀的影響打下基礎(chǔ)。4：應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)對廣西巴馬小型豬及長白豬1日齡、30日齡及180日齡肝臟組織樣本，GHR、JAK2和IGF—I基因表達(dá)進(jìn)行表達(dá)分析。結(jié)果表明：巴馬小型豬3個檢測基因從1日齡到30日齡表達(dá)量相對減少，而長白豬表達(dá)量相對增加。GHR、JAK2和IGF．I基因在三個檢測時間點(diǎn)的表達(dá)量，長白豬顯著高于廣西巴馬小型豬(P

6、1分泌的減少與GHR、JAK2、IGF．I基因轉(zhuǎn)錄差異共同對小型豬的矮小性狀產(chǎn)生影響?！娟P(guān)鍵字】廣西巴馬小型豬生長軸基因多態(tài)性表達(dá)廣西大掌司旺b論文廣西巴馬小型豬生長軸關(guān)鍵基因研究THESTUDIESoNKEYGENESoFGRoWTHAⅪSINGUANGⅪBAMLA．MINIPIGPoPULArIONABSTRACTAnimalgrowthanddevelopmentarecomplexandsophisticatedbiologicalmetabolicprocesses，inwhichgeneticgenesandhormonesmakea

7、llimportantrole．Inthegrowthcontrolsystem，theregulationofvariousfactorsonthegrowthismainlyachievedthroughthegrowthhormoneaxis．TheSNPsandmRNAexpressionofsomekeygenesofgrowthhormoneaxisweredeterminedinthepresentstudy,withattempttoverifytherelationshipbetweenthesekeygenesandGuang

8、xiBamamini-pigdwarfism．Theresultsoftheexperimentwereshowedasfollows：