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《廣西巴馬小型豬tau基因真核表達載體的構建及功能驗證》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、分類號UDCS813．3碩士學位論文廣西巴馬小型豬Tall基因真核表達載體的構建及功能驗證陳少梅學科專業(yè)動物遣佳直弛墨繁殖指導教師整獨生砑窒員論文答辯日期2Q13生魚月3目學位授予日期答辯委員會主席蘭王堡數(shù)握廣西大學學位論文原創(chuàng)性和使用授權聲明本人聲明所呈交的論文，是本人在導師的指導下獨立進行研究所取得的研究成果。除已特別加以標注和致謝的地方外，論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含本人或他人為獲得廣西大學或其它單位的學位而使用過的材料。與我一同工作的同事對本論文的研究工作所做的貢
2、獻均已在論文中作了明確說明。本人在導師指導下所完成的學位論文及相關的職務作品，知識產(chǎn)權歸屬廣西大學。本人授權廣西大學擁有學位論文的部分使用權，即：學校有權保存并向國家有關部門或機構送交學位論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或其它復制手段保存、匯編學位論文。本學位論文屬于：口保密，在年解密后適用授權。留不保密。(請在以上相應方框內(nèi)打“√”)論文作者簽名：陸穸桶指導教師簽名：萼m．作者聯(lián)系電話：J肌踟蛆2，日期：沙f≥．6
3、．-]日期山仔．叩電子郵箱：奠加鉀p痧礦Z圳廣西巴馬小型豬Tat,,基因真核表達載體的構建及功能驗證摘要Tau蛋白可促進微管蛋白聚集形成微管并保持其穩(wěn)定性，過度磷酸化時會在神經(jīng)元內(nèi)形成神經(jīng)纖維纏結(jié)，是阿爾茨海默病的標志性病變之一。本研究的目的是通過克隆廣西巴馬小型豬Tau基因，構建其真核表達載體，并對其功能進行驗證，為廣西巴馬小型豬阿爾茨海默病模型的制作奠定基礎。根據(jù)GenBank中豬的Tau基因預測序列設計引物，以廣西巴馬小型豬腦組織總RNA進行RT-PCR，獲得的序列與參考序列相比缺少1134bp。應
4、用巢式PCR和5'RACE進行缺失片段的驗證，發(fā)現(xiàn)一處編碼區(qū)缺失(+344,-,+1389bp)和兩處選擇性剪接(+191~+277bp、+1526,-d-1579bp)，由此構成了四個可變剪接體。將4個序列提交至GenBank中，獲得四個登錄號KC473498、KC473499、KC473500、KC473501。參考人的PDGF-B基因轉(zhuǎn)錄起始位點上游序列設計兩對引物，用于擴增PDGF-B基因的啟動子，獲得PDGF—I)305和PDGF—p1501兩段長度不同的序列，并克隆至保留啟動子的pEGFP．N
5、1和不含啟動子的pEGFP一1載體中。神經(jīng)細胞PCI2的轉(zhuǎn)染實驗結(jié)果表明PDGF—p305和PDGF—p1501片段均具有啟動子功能，PDGF—p305的啟動能力強于PDGF．p1501，雙啟動子的載體的啟動功能強于單啟動子載體。將啟動功能較強的載體pPDGF-13305一EGFP—l和pPDGF—IB305-EGFP-N1轉(zhuǎn)染至神經(jīng)細胞PCI2與非神經(jīng)細胞PKl5和C2C12中，結(jié)果顯示pPDGF一13305具有較高的神經(jīng)組織特異性。利用Taul215片段構建真核表達載體pPDGF一13305．Taul
6、215-EGFP．1和pPDGF-13305一Taul215．EGFP-N1，轉(zhuǎn)染PCI2細胞發(fā)現(xiàn)，前者的表達量低于后者，且后一組的細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變；利用脂質(zhì)體介導法將質(zhì)粒pPDGF一13305一Taul215一EGFP-N1直接注射小鼠睪丸及卵巢生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因小鼠，經(jīng)PCR驗證，在F1代小鼠中陽性小鼠的比率為13．9％。以上結(jié)果表明：本研究成功克隆了廣西巴馬小型豬Tau基因，構建了真核表達載體pPDGF一13305一Taul215一EGFP．1和pPDGF-13305一Taul215．EGFP-N1，并
7、可在細胞中表達，為后期廣西巴馬小型豬阿爾茨海默病動物模型的制作奠定了基礎。關鍵詞：廣西巴馬小型豬阿爾茨海默病Tau基因PDGF—pTHEC0lNSTRUCTl0INANDFOI胭ATl0NAI，IDENTIFYCATIONOF2么UGE八哐EI7KARYOTICEXPRESSIONⅦCTOROF(H7ANGⅪBAMAM匝NI．PIGABSTRACTTauproteinhasanimportantroleintheformationandstabilityofcytoskeleton．Hyperphosph
8、orylationofTauproteinwillleadtoneurofibrillarytangles，whichisoneofmarkersforAlzheimer'sdisease．Thus，theobjectiveofcurrentstudyistocloneandconstructtheeukaryoticexpressionvectorofTaugenefromGuangxiBamamini—pigandtoid
