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《廣西巴馬小型豬α干擾素基因克隆及其真核表達載體的構(gòu)建.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、南方農(nóng)業(yè)學(xué)報JOURNALOFSOUTHERNAGRICULTURE2013，44(9)：1558—1563ISSN2095—1191；CODENNNXAABhttp：／／www．nfnyxb．cnDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2013．9．1558廣西巴馬小型豬儀干擾素基因克隆及其真核表達載體的構(gòu)建吳丹L2，蘭干球-，郭亞芬-，陳寶劍1，陳少梅1，蔣欽楊1+(1廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，南寧530005；2桂林醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實驗教學(xué)中心，廣西桂林541002)摘要：【目的】克隆廣西巴馬小型豬ot干擾素基因(polFN-a)全部
2、編碼序列并構(gòu)建其ntH孚L動物真核表達載體，為研發(fā)重組豬干擾素類免疫佐劑及生物治療制劑提供參考依據(jù)?！痉椒ā繎?yīng)用RT—PCR擴增廣西巴馬小型豬polFN-a編碼序列，鏈接至pMDl8-T載體構(gòu)建重組質(zhì)粒，以測序正確的重組質(zhì)粒為模板，PCR擴增帶有酶切位點的polFN-a基因，然后連接真核表達載體pTARGET構(gòu)建重組表達載體pTARGET—polFN—ot，并轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞DH5a，經(jīng)雙酶切初步鑒定正確后送至北京諾賽生物有限公司測序，用DNASTAR軟件及PrimerPremer5．0等對獲得的基因序列進行分析?！窘Y(jié)果】以廣西巴馬小型豬總RNA為模板擴增獲
3、得的目的片段為618bp，包含polFN-a基因全部編碼序列；將克隆獲得的polFN-a基因插人哺乳動物真核表達載體pTARGET中，可成功構(gòu)建廣西巴馬小型豬重組表達載體pTAR-GET．polFN一0【。廣西巴馬dx型豬polFN-a與GenBankJ2已發(fā)表的豬、鼠、人刪．d基因同源性分別為97．o％、78．2％和66．3％；其成熟肽與普通豬相比，共有17個位點發(fā)生堿基突變，其中第63、189、198、288、544、545位點為無義突變，第88、119、163、182、186、195、263、301、306、553、560位點為錯義突變?！窘Y(jié)論】IF
4、NLa成熟肽在哺乳動物中保守性較差；克隆獲得的廣西巴馬小型豬polFN-a基因能成功插入哺乳動物真核表達載體pTARGETqb構(gòu)建重組表達載體pTAR—GET．polFN—ot，為研發(fā)重組豬干擾素類生物治療制劑、免疫佐劑、構(gòu)建小型豬疾病動物模型等奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：廣西巴馬小型豬；刪一d基因；克??；真核表達載體；構(gòu)建中圖分類號：$828．89文獻標志碼：A文章編號：2095—1191(2013)09—1558—06Cloninginterferon-o【geneofGuangxiBamamini-pigandconstructingitseukaryoti
5、cexpressionvectorwuDanl”，LANGan—qiul，GUOYa—f色n1，CHENBao-jianl，CHENShao—meil，JIANGQin-yang1+(1CollegeofAnimalScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China；2TeachingandExperimentCenterofBasicMedicineofGuilinMedicalUniversity，Guilin，Guangxi541002，China)Abstract：【Objectiv
6、e】AllcodedsequencesofBama—minipiginteferon—otgenewereclonedanditseukaryoticex—pressionvectorwasconstructedtoprovidereferencesforrestructuringswineinterferonimmunologicadiuvantandbiothera．PYpreparations．【Method]Apairofspecificprimersforporcineinterferon-alphal(polFN-a)wasdesignedan
7、dsynthesizedaccordingtogenesequence．a(chǎn)ndpolFN—olgenewasamplifiedbyRT—PCRfromperipheralsbloodlymphocytesofBama—minipig．ThenpolFN—aCDSwasclonedintopMDl8一Tvectorandsequenced．Moreover．po刪一olgenewithenzymesiteswasclonedintoeukaryoticexpressionvectorpTARGETtoconstructrecombinantexpressio
8、nplasnfidpTARGET—polFN—danditwast
