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1、南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)J0uRNAL0FsouTHERNAGRIcuLTuRE2013，44(6)：1022—1025ISSN2095—1191：CODENNNXAABhttp：／／www．nfnyxb．cnDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2013．6．1022廣西巴馬小型豬ApoE基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定蘇秀珍，蔣欽楊，陳少梅，郭亞芬+，蘭干球(廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，南寧530005)摘要：【目的】構(gòu)建廣西巴馬小型豬載脂蛋白E基因(ApoE)真核表達(dá)載體，為生產(chǎn)轉(zhuǎn)ApoE基因的廣西巴馬小型豬奠定基礎(chǔ)?！痉椒ā坎捎肦T—PcR從廣西巴馬小型豬
2、肝組織中擴(kuò)增出ApoE基因編碼序列，將該基因連接至pEGFP—c1載體上，利用雙酶切和測(cè)序?qū)χ亟M質(zhì)粒pEGFP．c1一ApoE進(jìn)行鑒定，并將重組質(zhì)粒pEGFP—c1一ApoE轉(zhuǎn)染PKl5細(xì)胞?！窘Y(jié)果】廣西巴馬小型豬ApoE基因編碼區(qū)序列長(zhǎng)954bp，編碼317個(gè)氨基酸，與GenBaIll【已公布的豬ApoE基因cDNA序列(NM214308)對(duì)應(yīng)區(qū)段同源性為100％。構(gòu)建的重組質(zhì)粒pEGFP．c1一ApoE轉(zhuǎn)染PKl5細(xì)胞48h后，在熒光顯微鏡下轉(zhuǎn)染細(xì)胞發(fā)出熒光，細(xì)胞形態(tài)清晰，可見(jiàn)細(xì)胞核?！窘Y(jié)論】廣西巴馬小型豬ApoE基因能與pEGFP-c1載體重組構(gòu)建pEGFP．
3、C1一ApoE真核表達(dá)載體，有效表達(dá)出ApoE蛋白。關(guān)鍵詞：廣西巴馬小型豬；載脂蛋白E基因；pEGFP—c1載體；重組質(zhì)粒；真核表達(dá)載體中圖分類(lèi)號(hào)：S828．99；0786文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：2095—1191(2013)06—1022—04ConstructionandidentificationofApoEgeneexpressionVectorforGuangxiBamamini—pigSUXiu—zhen，JIANGQin—yang，CHENShao—mei，GUOYa—fen+，LANGan—qiu(CollegeofAnimalScienceandT
4、echnology，Guallg)【iUniversity，Nanning530005，China)Abstract：【0bjective】AneukaryoticexpressionvectorofApoJ咖叩r0￡e而E(ApoE)geneinGuang)【iBamamini—pigwasconstructedtopmviderefeI℃ncesforpmducingGuangxiBamamini—pigwithApoE【Method】ThecodingsequenceofApoEgenewasampli6edfromliverofGuang)【iBamamin
5、i_p培byRT-PCR，andthissequencewasinsenedintopEGFP-C1Vector．TherecombinantplasmidspEGFP—C1一ApoEwereidentifiedbysequenceanddoubledigestion，andthenthepositiVeplasmidsweretransfectedintoPK15cells．【Result】withthelen昏hof945bp，theApoEgenecodingsequenceofGuangxiBamamini-pigencoded317aminoacidsan
6、dshared100％homologuetothepreviouslyreponedcDNAsequenceinGenBank(NM一214308)．After48hourstransfectionoftherecombinantplasmidspEGFP—Cl—Ap(壓intothePKl5cells，thecellshadvisibleexpressionofnuorescentandcellnucleus．【conclusion】The卻oEgeneofGuangxiBamamini—pigcanrecombineintopEGFP—C1VectorandeⅡ
7、宅ctivelyexpresstheApolipopmteinE．Keywords：GuangxiBamamini—pig；ApoEgene；pEGFP—C1vector；recombinantplasmids；eukaryoticexpressionvPPtnr0引言【研究意義】阿爾茨海默病(AlzIleimer’sdisease，AD)俗稱(chēng)老年癡呆癥，是嚴(yán)重影響老年人身心健康的主要疾病之一，目前我國(guó)患AD的人數(shù)高達(dá)600萬(wàn)人，居世界第一。AD是由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用所形成，其中遺傳因素在A(yíng)D尤其家族性AD的發(fā)病中起重要作用(杜琳，2008)?，F(xiàn)已確定與
