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《t細(xì)胞免疫及黑質(zhì)自身抗體在帕金森病發(fā)病機(jī)制中作用的初步研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文T細(xì)胞免疫及黑質(zhì)自身抗體在帕金森病發(fā)病機(jī)制中作用的初步研究姓名：張艷玲申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)生物學(xué)指導(dǎo)教師：蘇炳銀20080501第三軍醫(yī)人學(xué)博士學(xué)位論文T細(xì)胞免疫及黑質(zhì)自身抗體在帕金森病發(fā)病機(jī)制中作用的初步研究摘要帕金森病(Parkinson’sDisease，PD)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見的一種變性疾病，主要臨床特點為：靜止性震顫、肌強(qiáng)直、姿勢異常和運動減少。該病是影響中老年人生活質(zhì)量的主要原因之一。中腦黑質(zhì)多巴胺(DA)能神經(jīng)元的進(jìn)行性變性、死亡是PD的主要病理改變。但
2、是到目前為止，PD的發(fā)病機(jī)制尚不明確。選擇性的多巴胺神經(jīng)元的損害，是PD研究的重要方向。目前的氧化應(yīng)激學(xué)說、興奮性氨基酸學(xué)說、鈣的細(xì)胞毒作用學(xué)說以及A9區(qū)多巴胺神經(jīng)元特異蛋白的表達(dá)，均從不同角度解釋了上述現(xiàn)象。但是，針對上述機(jī)制采用抗氧化、抗興奮性氨基酸等措施后，并不能顯著緩解PD的發(fā)病和A9區(qū)的病程進(jìn)展。因此，目前認(rèn)為，現(xiàn)有學(xué)說不能完全解釋PD中選擇性的多巴胺神經(jīng)元損害，仍有其他不明因素參與了PD的發(fā)病過程，并在疾病的進(jìn)展中起重要作用。而與特異性損害密切相關(guān)的免疫系統(tǒng)，在近年來受到日益增多的重視。
3、在免疫和PD發(fā)病機(jī)制關(guān)系的研究中，細(xì)胞免疫和體液免疫是最受關(guān)注的領(lǐng)域。細(xì)胞免疫方面：已有的研究發(fā)現(xiàn)，T細(xì)胞亞群的比例在PD患者中有改變，PD患者的外周血中CD4+T淋巴細(xì)胞／CD8+T淋巴細(xì)胞比值降低，其中CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量增加。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)CD4+CD45RA+幼稚性T細(xì)胞的比例下降，而CD4+CD45R0+記憶性T細(xì)胞顯著增高，且丫6+T細(xì)胞顯著增高。目前已有多項研究結(jié)果提示，T細(xì)胞重要表面抗原CD4和CD8可能參與了PD發(fā)病，但尚無直接證據(jù)。體液免疫方面：在眾多的研究中，PD患者血清中是
4、否存在針對黑質(zhì)的自身抗體是備受爭議的，且長期以來該課題得以高度關(guān)注。然而，到目前為止尚無明確結(jié)論。雖然如此，多數(shù)研究者仍然確信有一種自身抗體可能參與了黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元的損傷過程。鑒定該抗體及抗原，對PD發(fā)病機(jī)制的研究具有重要意義，且可能為PD的治療提供新思路?；谝陨详P(guān)于PD的細(xì)胞免疫和體液免疫研究現(xiàn)狀，我們在以往研究的基礎(chǔ)上，觀察了在不同劑量丫射線全身照射下，外周血淋巴細(xì)胞減少后對PD的發(fā)病情況的影響；然后利用分別敲除CD4和CD8的小鼠PD模型，初步分析了敲除CD4和CD8對9第二軍醫(yī)人學(xué)博士學(xué)
5、位論文PD嚴(yán)重程度的影響；同時在實驗中利用PD小鼠的血清和臨床病例的血清，進(jìn)行了初步的黑質(zhì)靶抗原的分析。本研究分為三部分進(jìn)行：第一部分：實驗中使用不同劑量丫射線(OG”O(jiān)．5Gy、2．OGy和3．5Gy)全身照射對小鼠進(jìn)行預(yù)處理，之后使用MPTP腹腔注射建立PD小鼠模型。用高效液相檢測小鼠紋狀體多巴胺和其代謝產(chǎn)物的水平、免疫組化檢測黑質(zhì)神經(jīng)元數(shù)量和膠質(zhì)細(xì)胞活化，同時檢測了射線照射后外周血淋巴細(xì)胞數(shù)量改變。結(jié)果提示：2．OGy和3．5GW射線進(jìn)行全身預(yù)照射后，外周血淋巴細(xì)胞數(shù)量迅速而明顯的下降；而O．
6、5Gw射線進(jìn)行全身預(yù)照射后，在觀測的7天內(nèi)，外周血淋巴細(xì)胞數(shù)量總體評價較無照射對照組稍增高。高效液相提示，0．5Gy的丫射線進(jìn)行全身預(yù)照射后，紋狀體多巴胺含量較對照組降低，而2．oGy的丫射線進(jìn)行全身預(yù)照射后，紋狀體多巴胺含量較對照組增高，3．5Gy的的丫射線進(jìn)行全身預(yù)照射后，紋狀體多巴胺含量與對照組相比無明顯差異。我們認(rèn)為：1、不同的低劑量Y射線全身預(yù)照射可以對MPTP致C57BL／6小鼠多巴胺神經(jīng)元損傷的嚴(yán)重程度有不同影響，并非都可以提供神經(jīng)保護(hù)作用。我們認(rèn)為在本實驗中發(fā)現(xiàn)的2．OG"射線進(jìn)行全
7、身預(yù)照射的神經(jīng)保護(hù)作用，可能是因為外周血中淋巴細(xì)胞的大量減少導(dǎo)致的；與之相反，O．5Gw射線進(jìn)行全身預(yù)照射后，外周血中淋巴細(xì)胞輕度增多，導(dǎo)致MPTP注射后的紋狀體多巴胺含量進(jìn)一步降低。2、以往關(guān)于“射線的神經(jīng)保護(hù)”的研究中認(rèn)為，輻射的毒物興奮效應(yīng)(radiationho衄esis)可能是神經(jīng)保護(hù)作用產(chǎn)生的機(jī)制，但是在本研究中提示，該機(jī)制未明顯參與神經(jīng)保護(hù)。第二部分：實驗中分別利用CD4敲基因小鼠、CD8敲基因小鼠和野生型小鼠，在接受MPTP腹腔注射后，觀察各組小鼠在MPTP處理后PD嚴(yán)重程度的改變。
8、衡量嚴(yán)重程度的指標(biāo)使用：紋狀體多巴胺和其代謝產(chǎn)物的水平、免疫組化檢測黑質(zhì)神經(jīng)元數(shù)量、Westem—Blot檢測的紋狀體TH蛋白水平。同時對比觀察了不同組小鼠黑質(zhì)膠質(zhì)細(xì)胞活化情況。結(jié)果提示：C57BL／6小鼠在MPTP腹腔注射后10天，HPLC．EC法檢測提示紋狀體DA，DoPAC和HVA均明顯下降；免疫組化發(fā)現(xiàn)黑質(zhì)DA能神經(jīng)元數(shù)量減少，小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞活化；western-blot提示紋狀體TH含量下降。分別敲除cD4“cD8+T細(xì)胞后，兩組敲基因動物均出現(xiàn)D
