帕金森病患者抗大鼠黑質膜蛋白IgG抗體對黑質的免疫損傷作用

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1、華中科技大學碩士學位論文帕金森病患者抗大鼠黑質膜蛋白IgG抗體對黑質的免疫損傷作用姓名：侯曉妹申請學位級別：碩士專業(yè)：神經病學指導教師：孫圣剛2003.4.1華中科技大學同濟醫(yī)學院碩士學位論文BSACAS．4BCSFDADAB叩EUSAGSHHLA．DRKSCNN聃DlIPDSDS．PAGE對比TBSTHTGF．Ⅱ1NF-Ⅱ0主要縮略語BovineserumalbuminCNBractivitiedsepharose—4BCerebrospinalfluidDopamine3,3’．DiaminobenzidinetetrahydrochlorideDithiothr

2、eitolEnzyme．LinkedImmunosorbentAssayGlutathioneHistocompatibilityleukocyteantigen-DreceptorPotassiumthiocyanateMajorhistocompatibilitycomplex．11Parkinson’SdiseaseSDS-polyacrylamidegelelectrophoresisSubstantianigraparcompacta聰s-b確gYedsalineTyrosinehydroxylaseTumorgrowthfactor-ⅡTumornccro

3、gisfsctor一Ⅱ牛血清白蛋白溴化氫活化的瓊脂糖4B腦脊液多巴胺3。3’一二氨基聯苯胺二硫蘇糖醇酶聯免疫吸附實驗谷胱甘肽組織相容性白細胞抗原D受體硫氰酸鉀主要組織相容性復合物．II帕金森病SDS．聚丙烯酰胺凝膠電泳黑質致密部Tris緩沖液酪氨酸羥化酶腫瘤生長因子一a腫瘤壞死因子-n華中辯技大學羈濟睡學院硬士學位論文帕金森病患者抗大鼠黑質膜蛋白IgG抗體對黑質的免疫損傷作用研究生侯曉妹導師孫圣剛教授中文摘要第一部分：帕金森病患者抗大鼠黑質膜蛋白IgG抗體的提取【目的】用免疫親和層析法掇取帕金森病患潸抗大鬣黑質膜愛自的IgG抗體，梭瀑其方法學的特募性?！痉椒ā坎钏匐x心

4、法粗提SD大鼠黑質質膜，并將其偶聯至。惦r喇v黼醴—sc

5、婦旺璐e犏上，將lgG鑭旗床確診酶PD病久巍滿上柱，收集洗脫峰，將洗脫產物逑一步邋ProteinA親和鼷析柱，收集洗脫峰，采用聞接ELISA和SDS-PAGE分別檢測洗脫產物的抗原結合活性和純度。，{、【結祭lEl囂A顯示瀚捌誠蛔k餓曲糕粥褥瑟褥縫和ProteinA層拆組的洗脫產物OD值均大于陰性對照組的兩倍，且前者大于后者。SDS-PAGE可見c!NBractivitied--sephamse4B層析綴的洗脫產物為翻條淡粢熬條帶，經ProteinA透一疹層羲麓瓣洗麓聲蘩為穩(wěn)條瀵壤瓣條帶，分子量分別為25kDa

6、，50kDa，遮與lgG輕鏈和翳鏈相對分子量的理論假相符合，誕明其輿有抗原縮合活瞧并達到魄泳純。＼j廣．2．華中科技大學I司濟醫(yī)學院碩I：學位論文【結論】免疫親和層析法可獲得PD病人抗大鼠黑質膜蛋白的IgG抗體?！娟P鍵詞】帕金森?。徊钏匐x心法；免疫親和層柝r／＼第二部分：抗大鼠黑質膜蛋白lgG抗體對黑質的免疫損傷作用研究【目的】檢測所提取的IgO抗體對黑質DA神經元的免疫損傷作用，并進一步探討PDlgG抗體通過黑質膜蛋白介導DA神經元損傷的作用機制，初步研究可能的靶抗原定位和性質。【方法】將提取的PDIgG、正常人IgG和PBS分別立體定向注入大鼠一側的黑質致密部，免

7、疫組化檢測三組的TH陽性細胞數。用注射側的細胞數比非注射側的細胞數，以其比值大小代表注射物對黑質的損傷作用。SDS．PAGE分離差速離心后所得的三組沉淀成分，將提取的抗大鼠黑質膜蛋白的IgO抗體作為一抗進行免疫印跡分析。廠f【結果】注射四周后，免疫組化顯示PDIgG組注射側的TH陽性細胞數比＼、非注射側下降了51％，而正常IgG組僅下降了6％，PBS組未見明顯改變。統計學分析注射物對黑質的損傷作用顯示，PD190組與正常]go組相比有顯著性差異(P

8、，共有8條不同的條帶。其中分弋子量為73．4kDa，63．4kDa的這兩條條帶是三組所共有的。吵【結論】抗大鼠黑質膜蛋白Igo抗體對黑質DA神經元具有免疫損傷作用，并提示損傷的機制是通過黑質膜蛋白介導而產生的?！娟P鍵詞l帕金森??；黑質膜蛋白：自身免疫；免疫損傷-3-蘭!登墊奎蘭旦鯊墾蘭墮堡主蘭絲堡蘭TheImmuneDestructionofSNNeuronsthatisInitiatedbytheIgGagainstRatSNMembranesInvolvedinthePDSeraPostgraduateHunXiaomeiTutorProf．Su