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《‘津田’蕪菁uv-a誘導的泛素化相關基因brubc1和brrub1的克隆及表達分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、東北林業(yè)大學碩士學位論文‘津田’蕪菁UV-A誘導的泛素化相關基因BrUBC1和BrRUB1的克隆及表達分析姓名：閔遠琴申請學位級別：碩士專業(yè)：發(fā)育生物學指導教師：李玉花20110629摘要本實驗室前期在研究‘津田’蕪菁(Brassicarapa"rsuda’)根皮花青素的合成中發(fā)現(xiàn)，各種光質(zhì)中只有UV_A能特異誘導‘津田’蕪菁根皮花青素的合成，可能存在UV-A特異誘導花青素合成的光信號轉(zhuǎn)導途徑；在差異蛋白組學篩選鑒定特定的光信號轉(zhuǎn)導因子過程中還發(fā)現(xiàn)，UV-A光照處理后兩種泛素化相關蛋白質(zhì)增量表達。那么這兩種蛋白是否參與
2、了‘津田’蕪菁中UV認特異誘導花青素合成的信號轉(zhuǎn)導呢?為此，本論文在前期研究的基礎上，針對這兩個UV-A誘導下差異表達的泛素化相關蛋白UBC和RUB進行了基因克隆以及相關表達分析，研究其在‘津田’蕪菁不同組織和不同UV氌光照時間段后的表達特性，并構建過量表達載體，對這兩個基因進行轉(zhuǎn)化擬南芥，研究這兩個泛素化相關基因的過量表達是否影響花青素的合成，以篩選鑒定UV．A特異誘導的花青素合成相關信號轉(zhuǎn)導因子，這為進一步研究‘津田’蕪菁花青素合成受UV二A光誘導的分子機理提供基礎。本研究的主要結果如下：(1)從‘津田’蕪菁中克隆
3、到了兩個UV以誘導下增量表達的泛素化相關基因，分別命名為BrUBCl、BrRUBl。Southem雜交檢測顯示BrUBCl、BrRUBl在‘津田’蕪菁基因組中有個6個拷貝和5個拷貝。生物信息學方法分析表明，BrUBCl是泛素結合酶E2家族的成員，BrRUBl是泛素類似蛋白-o此外，還繪制了這兩個基因的進化樹，確定其進化地位。(2)B，．【愿a和B旭己僻J的表達特性分析通過Real．timePCR的方法定量分析表明：‘津田’蕪菁膨大直根表皮不見光處的白色表皮部分BrUBCl比植株地上接受光照的各個部分的表達都要低，表明B
4、rUBCl的表達是依賴光的。單獨對白皮進行UV_A照射后發(fā)現(xiàn)，1h的UV．A照射使BrUBCl表達顯著增加。白皮中BrRUBl的表達也受UV-A光誘導，長于1h的Uv-A照射使其表達量增加，但BrRUBl的高表達局限于花中，在根皮以及葉子中的表達及低。BrUBCl和BrRUBl的表達確實受UV-A光誘導。通過構建基因的亞細胞定位載體并在洋蔥表皮細胞中進行瞬時表達，在激光共聚焦顯微鏡下觀察到融合蛋白GFP．BrUBCl和GFP．BrRUBl定位于細胞核中。(3)BrUBCl和BrRUBl基因轉(zhuǎn)化擬南芥的研究通過Gatew
5、ay技術將BrUBCl和BrRUBl基因構建到過量表達載體pH7WG2D上，通過農(nóng)桿菌介導的擬南芥花絮真空滲透法，用于擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化以研究基因的功能，利用潮霉素篩選種子法，獲得了多個抗性植株。關鍵詞Uv-A；泛素化相關蛋白；花青素；信號轉(zhuǎn)導AbsrractAbstractOurformerresearchshowedthattheaccumulationofanthocyanidininBrassicarapa‘Tsuda’isspecificallyinducedbyUV-Airradiation．Wesuggest
6、edthattheremustbeauniquesignaltransductionpathwayspecialforUV—Aamongheterogeneouslight．Recently，inthestudyofscreeningfortmiqueUV-Asignaltransductionfactors，wefoundthattwoubiquitin·relatedproteinsareoverexpressedafterUVAirradiation．TheymayparticipateintheUV-Asign
7、altransduction．Inthisstudy，wetrytOgetclonesofthesecandidates，thenwemayharvestmanydetailsofthesegenesthroughbiologicalmethods．ItmightprovidecertainhelpforfurtherresearchofUv-AspecificinductionofanthocyanidinaccumulationinBrassicarapa‘Tsuda’．Themainresultsofthisst
8、udyareasfollows：(1)TwoUv-Aandubiquitin-relatedgeneswereclonedfromBrassicarapa‘Tsuda’，namedBrUBClandBrRUBI．SouthernblotshowedthatBrUBclandBrRUBlhavesixandfivecopesinth
