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《nnos磷酸化在大鼠神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病機(jī)制中的作用研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、南方醫(yī)科大學(xué)2014級(jí)碩士學(xué)位論文nNOS磷酸化在大鼠神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病機(jī)制中的作用研究TheeffectofnNOSphosphorylationinspinalcordofneuropathicpaininrat課題來源：廣東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目9151008004000027學(xué)位申請(qǐng)人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)委員肖鵬沖崔建修教授麻醉學(xué)科研型碩士研究生研究生學(xué)院2014年5月23日廣州碩士學(xué)位論文一警煳nNOS磷酸化在大鼠神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病機(jī)制中的作用研究碩士研究生姓名：肖鵬沖指導(dǎo)老師：崔
2、建修摘要背景：神經(jīng)病理性疼痛最新定義是指軀體感覺神經(jīng)系統(tǒng)的損傷或疾病而直接造成的疼痛而激發(fā)或引起的慢性疼痛疾病，在臨床治療過程是一個(gè)非常艱難的問題，對(duì)人們的生活問題有很大的影響。它是一種以異常痛敏、自發(fā)痛、痛覺過敏相關(guān)癥狀的慢性疼痛【l】?，F(xiàn)階段對(duì)其具體的發(fā)病情況是不了解的，這種疾病的發(fā)生時(shí)每年都在上漲，治療非常的緊急但是對(duì)于目前治療情況不是很好，在臨床醫(yī)學(xué)中的研究挑戰(zhàn)性性是非常大的。大量實(shí)驗(yàn)證明在神經(jīng)病理性疼痛的產(chǎn)生和維持時(shí)中樞敏化和外周中發(fā)揮了很重要的作用【2】。一氧化氮(NO)是神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)一種新型的神經(jīng)遞質(zhì)，它由一氧化氮合
3、酶(sos)催化而成。在神經(jīng)系統(tǒng)(nervoussystem)中的神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)是NO合成的關(guān)鍵酶。大量研究表明，nNOS調(diào)節(jié)就像神經(jīng)病理性疼痛和炎性痛這類的多種生理和病理過程，nNOS發(fā)揮了重要作用在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周中的神經(jīng)病理性疼痛里【3】。脊髓背角神經(jīng)元中的神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)的過度表達(dá)可由外周神經(jīng)(penpheralnervous)損傷所致，在除此之外還會(huì)有痛覺失常和痛覺過敏等癥狀‘41。要減輕坐骨神經(jīng)慢性壓迫(chronicconstrictioninjury,co)或脊神經(jīng)結(jié)扎(spin
4、alnerveligation，SNL)模型中的神經(jīng)病理性相關(guān)的疼痛反應(yīng)，可以在鞘內(nèi)或全身注射選擇性nNOS抑制劑或非特異性nNOS抑制劑；但是機(jī)械痛敏通過神經(jīng)損傷所誘導(dǎo)的是不能通過nNOS敲除鼠顯示出來的【5】。這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都說明神經(jīng)病理性疼痛都是有nNOS參與的。摘要不同程度上nNOS的活性影響是可以通過對(duì)其不同位點(diǎn)進(jìn)行磷酸化[6】。要降低nNOS活性，就先對(duì)神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)的Ser847位點(diǎn)進(jìn)行磷酸化，而磷酸化鈣調(diào)蛋白依賴激酶II(CaMKII)可以對(duì)其磷酸化，去制止與Ca2+．CaM的結(jié)合。nNOS活性是可
5、以通過在Ser847位點(diǎn)磷酸化增加，通過降低去磷酸化。有大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，nNOS磷酸化是在激酶和磷酸酯酶像鈣調(diào)蛋白、蛋白激酶A(PKA)、和蛋白激酶C(PKC)依賴激酶不同胞內(nèi)外信號(hào)調(diào)節(jié)下的。有研究表明，nNOS在體內(nèi)通過與其接頭蛋白CAPON相互作用，從而發(fā)揮調(diào)控作用【_71。但nNOS其接頭蛋白CAPON相互作用強(qiáng)度降低，不知是否是由于nNOS被CaMKII磷酸導(dǎo)致的，從而導(dǎo)致疼痛閾值增加也尚不得而知。目的：通過建立SNL神經(jīng)病理性疼痛模型，采用行為學(xué)，免疫蛋白印跡方法，免疫共沉淀與激光共聚焦實(shí)驗(yàn)，觀察SNL術(shù)后脊髓組織中C
6、aMKII磷酸化水平(活性)的變化，并鞘內(nèi)注射pCaMKII特異性抑制劑KN93，觀察其鎮(zhèn)痛療效和對(duì)脊髓背角和DGR中nNOS的表達(dá)量的影響，試圖闡明是否是CaMKII通過磷酸化nNOS，降低nNOS與其接頭蛋白CAPON在體內(nèi)的相互作用，從而提高nNOS磷酸化在神經(jīng)病理性疼痛中的鎮(zhèn)痛作用。第一節(jié)神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型的建立與疼痛閾值的測定及pCaMKII與nNOS表達(dá)水平檢測材料與方法：實(shí)驗(yàn)的對(duì)象是質(zhì)量150"--200g雄性SD大鼠。大鼠分籠飼養(yǎng)，大鼠飲食需要自由，間隔一天日以后換掉舊墊料。大鼠飼養(yǎng)的室內(nèi)溫度要一直在20--一
7、25℃，濕度50％～80％，循環(huán)在12～12h白天．黑夜進(jìn)行照明。要使大鼠的痛苦盡量減輕在每一步實(shí)驗(yàn)時(shí)，使用原則操作必須按照有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所需要的進(jìn)行?？偣卜纸M為2組是按照隨機(jī)化原則所分，第1組模型組，選用大鼠15只，制作L5脊神經(jīng)結(jié)扎(SNL)模型；第2組為假手術(shù)(Sham)組，選用大鼠15只，僅顯露脊神經(jīng)而不結(jié)扎。通過VonFreyfilament測定大鼠神經(jīng)結(jié)扎側(cè)(左側(cè))后足縮足反射閾值(MWT)。II碩士學(xué)位論文結(jié)果：1、與假手術(shù)組相比SNL模型組大鼠術(shù)后3天、7天和14天痛閾值均明顯降低(P<0．05)，并且低于術(shù)前基礎(chǔ)值
8、(P<0．05)。2、術(shù)后3天、7天和14天，腰段脊髓組織中總CaMKII水平無明顯變化，但是pCaMKII水平與假手術(shù)組相比則明顯增加；腰段脊髓組織中總nNOS水平無明顯變化，但是pnNOS水平與假手術(shù)組相比則明顯降低。結(jié)論：l、SNL術(shù)后，明顯
