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《dna甲基化在神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病機(jī)制中的作用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、博士學(xué)位論文密級DNA甲基化在神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病機(jī)制中的作用TheroleofDNAmethylationinthepathogenesisofneuropathicDaln?●作者姓名：學(xué)科專業(yè)：學(xué)院(系、所)：指導(dǎo)教師：王英麻醉學(xué)湘雅醫(yī)院郭曲練教授答辯委員會(huì)主中南大學(xué)二o～二年五月原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻(xiàn)均己在論文中作了明
2、確的說明。作者簽名：之筵日期：絲[z年上月韭日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。作者簽名：日期：醴年土月五日博士學(xué)位論文中文摘要摘要研究背景神經(jīng)病理性疼痛由神經(jīng)系統(tǒng)的損害或炎癥引起，是一種常見而特殊的慢性疼痛，以痛覺過敏、異常痛敏和自發(fā)痛為特征。目前發(fā)病機(jī)制不清
3、，發(fā)病率逐年上升，處理非常棘手而且目前的治療方法療效不佳，是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的挑戰(zhàn)性研究課題。眾多研究表明外周和中樞敏化在神經(jīng)病理性疼痛的產(chǎn)生和維持中發(fā)揮重要作用。外周和中樞敏化均與初級感覺神經(jīng)元、次級感覺神經(jīng)元以及膠質(zhì)細(xì)胞上疼痛相關(guān)分子和受體基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平的改變密切相關(guān)。表觀遺傳是指DNA序列不發(fā)生變化但基因表達(dá)卻發(fā)生了可遺傳的改變，主要體現(xiàn)在DNA堿基上發(fā)生的甲基化修飾、染色質(zhì)重塑、基因印記、X．染色體失活以及非編碼RNA調(diào)控等方面。其中DNA甲基化是最早發(fā)現(xiàn)又普遍存在的基因表觀修飾方式之一，可能存在于所有高等生物中。DNA高甲基化能關(guān)閉相關(guān)基因的活性，去甲基化則可以誘導(dǎo)
4、基因的重新活化和表達(dá)。于是推測，表觀遺傳學(xué)機(jī)制尤其是DNA甲基化機(jī)制很可能參與神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生發(fā)展。相關(guān)研究較少，本課題的開展和順利完成可為神經(jīng)病理性疼痛的機(jī)制和治療研究提供新的思路和方向。研究目的觀察總體DNA甲基化水平在坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷(chronic博士學(xué)位論文中文摘要constrictioninjury，CCI)大鼠脊髓腰膨大中的變化；觀察DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNAmethyltransferases，DNMTs)DNMT1、DNMT3a和DNMT3b及甲基化CpG連接蛋白2(methyl—CpG-bindingprotein2，MeCP2)在CCI大鼠脊髓
5、腰膨大中表達(dá)的變化：觀察神經(jīng)病理性疼痛重要相關(guān)因子谷氨酸脫羧酶67(glutamatedecarboxylase67，GAD67)在CCI大鼠脊髓腰膨大中表達(dá)的變化及其編碼基因GADl啟動(dòng)子甲基化水平在CCI大鼠脊髓腰膨大中的變化；采用DNMT特異性抑制劑5．氮雜胞苷(5：azacytidine，5-AZA)鞘內(nèi)注射，觀察其對CCI大鼠神經(jīng)病理性疼痛的調(diào)節(jié)作用，探索神經(jīng)病理性疼痛的DNA甲基化調(diào)控機(jī)制。研究方法1．雄。[生Sprague。Dawley(SD)成年大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham組)和CCI組，測量各組大鼠機(jī)械痛閾和熱痛閡基礎(chǔ)值后，參考Bennett和Xie等的
6、方法構(gòu)建大鼠左側(cè)CCI模型；sham組進(jìn)行同樣的手術(shù)，暴露坐骨神經(jīng)但不結(jié)扎。分別于術(shù)后第3、5、7、i0、14天再次測定各組大鼠的機(jī)械痛閾和熱痛閾。各組大鼠術(shù)后14天測試完畢后于深麻醉下處死，取脊髓腰膨大段測定其總體DNA甲基化水平。2．Sham組和CCI組大鼠術(shù)后14天測試完畢后于深麻醉下處死，取脊髓腰膨大段采用免疫組織化學(xué)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscriptionpolymerasechainreaction，RT-PCR)和蛋白印跡(westernblot)方法檢測其DNMTl、DNMT3a、DNMT3b及MeCP2的表達(dá)。3．Sham組和CCI組
7、大鼠術(shù)后14天測試完畢后于深麻醉下處死，II博士學(xué)位論文中文摘要取脊髓腰膨大段采用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(real．timequantitativeRT-PCR，qRT-PCR)方法檢測其GAD67mRNA的表達(dá)，采用焦磷酸測序方法檢測其編碼基因GAD1啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化水平。4．腰段鞘內(nèi)置管成功的雄性SD成年大鼠隨機(jī)分為3組：假手術(shù)+生理鹽水組(sham+NS組)、CCI+生理鹽水組(CCI+NS組)、CCI+5·AZA10州組(CCI+5．AZA組)。術(shù)后第3天開始鞘內(nèi)注射NS或5-AZA10州(溶于N
