胃癌dna異常甲基化影響cxc型趨化因子cxcl14表達水平的研究

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2、????????????????????27參考文獻???????????????????????????29附致口汞·················································································3l謝???????????????????????????32綜述及參考文獻???????????????????????33學位論文獨創(chuàng)性聲明?????????????????????43學位論文使用授權聲明????????????????????43萬方數據溫州醫(yī)科大學碩士學位

3、論文胃癌DNA異常甲基化影響CXC型趨化因子CXCLl4表達水平的研究中文摘要背景：胃癌作為我國第二大惡性腫瘤，總體5年生存率不到20％，缺乏特異性早期診斷方式和有效治療方法是目前的研究短板。CXCLl4(C．X．Cmotifchemokineligand14)，作為趨化因子CXC子家族中新的一員，近年來發(fā)現在人體大部分組織中普遍表達。而在不同的人體惡性實體腫瘤中CXCLl4的表達情況高低不一。但在胃惡性腫瘤中CXCLl4的表達水平和臨床意義未見報道。目的：檢測胃癌組織和配對正常胃粘膜組織中CXCLl4的表達情況，探討表達差異的形成原因，并聯系臨床病理分型，

4、尋找在臨床上的應用意義。方法：利用實時熒光定量PCR(Realtime．PCR)的方法檢測60例腫瘤／正常配對樣本中CXCLl4信使RNA水平的表達差異。蛋白印跡法(WesternBlot)驗證多克隆抗原特異性后，免疫組織化學染色方法(Immunohistochemistry)檢測30例腫瘤／正常配對樣本中CXCLl4蛋白水平的表達差異。CXCLl4DNA啟動子區(qū)域甲基化水平采用重亞硫酸鹽測序法(bisulfitesequencingPCR)驗證。將胃癌細胞株AGS、SCG7901、BGC823和MGC803在去甲基化藥物地西他濱(5-Aza．2’．deox

5、ycytidine)不同濃度梯度處理后，采用Realtime．PCR檢測CXCLl4信使RNA表達恢復情況。最后聯系臨床病理分型和生存分析，利用卡方檢驗、Student、ST檢驗、Kruskal．WallisH檢驗、Kaplan．Meier生存曲線、Cox回歸方程等統(tǒng)計方法探討CXCLl4的臨床意義。結果：相對于配對胃正常粘膜組織，CXCLl4信使RNA在胃癌組織中的相對表達量為0．569，兩者差異有統(tǒng)計學意義(尸<0．001)。在配對胃正常粘膜組織中CXCLl4蛋白半定量表達水平約為90％以上，而腫瘤組織中蛋白水平降為60％左右，兩者差異存在統(tǒng)計學意義(P

6、

7、=-O．498)。再將甲基化位點逐一分析，發(fā)現第2、6、7、8、9號甲基化位點在正常組織中甲基化率為0，而腫瘤組織中高達40．67％，差異存在統(tǒng)計學意義(尸<0．001)。轉向細胞實驗，當地西他濱處理胃癌細胞株AGS、SCG7901、BGC823和MGC803五天后，AGS、SCG7901和BGC823中CXCLl4信使RNA的表達量得到提高(P<0．001)。但在不同的藥物濃度之間，表達恢復情況未見統(tǒng)計學差異(尸>0．05)。AGS細胞DNA甲基化測序分析示在去甲基藥物處理后，CXCLl4啟動子區(qū)域甲基化率從用藥前的85．62％下降到12．55％(尸<0．

8、001)，但在藥物濃度梯度之間甲基化水平改變仍未見明