hcmv先天性感染大鼠空間學習記憶障礙的突觸可塑性機制研究

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1、南方醫(yī)科大學2010級博士學位論文HCMV先天性感染大鼠空間學習記憶障礙的突觸可塑性機制研究StudyonSynapticPlasticityofRatswithDysfunctionofSpatialLearningandMemorybyHumanCytomegalovirusCongenitalInfection課題來源：國家自然科學基金(30940079)學位申請人導師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學院吳德蓿久朱兒科學學術型博士研究生第二臨床醫(yī)學院2013年3月1日廣州博士學位論文HCMV先天性感染大鼠空間學習記憶障礙的突觸可塑性機制研究博士研究生：吳德指導教

2、師：唐久來摘要研究背景人巨細胞病毒(HumanCtyomegalovirus，HCMV)是感染發(fā)育中的胎兒最常見的病毒，在發(fā)展中國家和低收入的群體中廣泛傳播，也是導致兒童出生缺陷主要因素之一。目前，HCMV先天性感染已經成為智力低下和學習困難的主要病因。為探討HCMV先天性感染致學習記憶功能障礙的機制，課題組從2002年開始，成功的建立HCMV先天性感染的系列鼠模型。早期的預實驗研究表明，HCMV先天性感染子代鼠出現(xiàn)顯著地空間學習記憶障礙，其機制不明確。為探討HCMV先天性感染對子代大鼠空間學習記憶的影響，本研究擬建立先天性HCMV感染的SpragueDawley(S

3、D)大鼠模型，應用病理、神經行為學檢測方法(Morris水迷宮、懸吊和曠場實驗等)，探討HCMV先天性感染對子代大鼠空間學習記憶和運動功能發(fā)育的影響及病理機制；應用在位場電位記錄的方法，檢測HCMV先天性感染對仔鼠海馬DG區(qū)、CAl區(qū)突觸可塑性的影響；應用免疫組化和蛋白電泳技術等技術，分析仔鼠海馬組織中觸發(fā)突觸可塑性的NMDA受體亞單位的表達情況，檢測誘導和維持突觸可塑性的關鍵蛋白、分子CaMKII和Ca2+的水平，從海馬損傷的病理、突觸可塑性特性改變的神經生理學、以及影響突觸可塑性的蛋白、分子水平變化角度，闡明HCMV先天性感染致大摘要鼠海馬空間學習記憶損傷的機制，

4、對防治兒童感染HCMV而導致神經殘疾具有重要的理論意義和臨床價值。第一部分HcMV先天性感染大鼠模型建立及空間學習記憶等神經行為的檢測目的建立HCMV先天性感染的SD大鼠模型，探討HCMV先天性感染對子代大鼠空間學習記憶、運動和情緒發(fā)育的影響。方法將40只12周齡的SPF級SD大鼠按雌雄3：1合籠交配，妊娠第4天(實驗組)腹腔內接種lxlO南TCID50HCMV病毒懸液0．5ml／早，對照組同期接種等量的HELF細胞懸液。檢測胎鼠腦組織病毒顆粒，免疫組化檢鋇JJHCMVpp65等特異性抗原。分別對實驗組和對照組生后第4周的仔鼠，進行空間學習記憶(Morris水迷宮)、

5、運動功能(懸吊試驗、斜坡實驗、傾斜板實驗、不自主運動和自主運動)和情感行為(拒俘反應試驗和曠場實驗)的檢測。統(tǒng)計處理使用SPSS20．0軟件，測定結果以x+s表示，應用SPSS20．0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據進行處理，測定結果以x+s表示，Morris水迷宮空間學習記憶測試數(shù)據采用廣義混合線性模型進行統(tǒng)計分析，等級資料采用秩和檢驗。計數(shù)資料用x2檢驗，作圖用Origin8．0，顯著性水準Q取0．05，雙側。結果(1)實驗組孕鼠每窩產仔數(shù)、一周內仔鼠的死亡率和海馬HCMV病毒分離陽性率均顯著高于對照組(P

6、狀回細胞帶細胞數(shù)有所減少，組織結構稀疏，排列紊亂。子代海馬神經元細胞培養(yǎng)物中成功檢測到HCMV早期感染標志物(主要博士學位論文即可早期抗原，MIE)，同時也找到HCMV病毒活動性感染的標志物pp65，證實HCMV先天性中樞系統(tǒng)感染模型的建立。(2)空間學習記憶結果(Morris水迷宮)：廣義混合線性模型模型有統(tǒng)計學意義(F=120．113，P=0．000)，實驗組第l-4天逃避潛伏期分別(dl：96．33+17．29：d2：74．35±12．6l：d3：56．63±16．50；d4：41．02+6．83)比對照組第1．4天逃避潛伏期(dl：48．37±12．10；d2

7、：31．40±9．04；d3．-23．38+9．21；d4：17．13±3．99)延長，兩組間差異存在顯著性(F=499．473，P<0．05)，四天之間結果差異存在顯著性(F=123．623，P<0．05)采用廣義混合線性模型檢驗，考慮速度為協(xié)變量，模型有統(tǒng)計學意義(F=108．163，P=O．000)，實驗組第1．4天的總路程(dl：14．34±6．55；d2：10．47±3．92；d3：8．35±4．10；d4：6．45±3．63)高于對照組1．4天的總路程(dl：7．66±1．89；d2：5．04±2．32；d3：4．12±1．91；d4：3