口腔鱗癌患者與健康人唾液差異表達蛋白的初步研究

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1、《中國圖書資料分類法》分類號:R739.85單位代碼：10660學號:S100343貴陽醫(yī)學院2013屆碩士學位論文口腔鱗癌患者與健康人唾液差異表達蛋白的初步研究研究生：孫昆俊導師：馬洪教授年級：2010級專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學2013年5月25日基金項目：貴陽市科技局社發(fā)攻關項目基金貴陽醫(yī)學院2013屆碩士研究生學位論文目錄摘要??????????????2前言??????????????3材料與方法????????????5結果??????????????14討論??????????????21參考文獻?????????????29英

2、文摘要?????????????34致謝??????????????36略縮詞表?????????????37論文原創(chuàng)性聲明??????????38附：綜述????????????39-1-貴陽醫(yī)學院2013屆碩士研究生學位論文口腔鱗癌患者與健康人唾液差異表達蛋白的初步研究專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學（頜面外科方向）研究生：孫昆俊導師：馬洪教授摘要目的：1、通過口腔鱗癌患者唾液及健康人唾液中蛋白質組成的對比分析，初步研究口腔鱗癌患者唾液蛋白與健康人唾液蛋白差異表達情況。2、建立口腔鱗癌唾液蛋白質組雙向電泳圖譜，為進一步獲取口腔鱗癌患者唾液蛋白質

3、組的生物學信息打下初步基礎。方法：收集口腔鱗癌患者唾液17例，健康人唾液17例，通過以雙向凝膠電泳技術分離唾液中的蛋白質，考染染色獲取唾液蛋白質組雙向電泳圖譜，經(jīng)MALDI-TOF/MS質譜鑒定以及搜索NCBI數(shù)據(jù)庫進行生物信息學分析，獲得口腔鱗癌中差異表達的蛋白質信息。結果：選取口腔鱗癌和正常人唾液中具有明顯差異表達的10個蛋白質點，對其進行質譜鑒定和生物信息學分析，共鑒定出4種差異表達的蛋白質，其分別為S100A8、S100A8/S100A9、表皮角蛋白2在口腔鱗癌唾液中均呈高表達，而載脂蛋白A-Ⅰ在口腔鱗癌唾液中呈低表達。結論：

4、1、通過唾液蛋白質組學方法對口腔鱗癌患者唾液和健康人唾液中差異表達蛋白進行檢測，建立了口腔鱗癌唾液蛋白質組雙向電泳圖譜，并鑒定出口腔鱗癌的差異蛋白質，為深入研究口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展的分子機制提供了實驗基礎，并為獲取口腔鱗癌患者唾液蛋白質組的生物學信息建立了初步基礎。2、本課題證明了在口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展過程中這些功能不同的差異表達蛋白可能起重要調控作用，但還有待進一步研究與探索其調控機制。關鍵詞：唾液口腔鱗癌蛋白質組學雙向電泳腫瘤標志物-2-貴陽醫(yī)學院2013屆碩士研究生學位論文前言口腔鱗癌（oralsquamouscellcarcinoma

5、,OSCC）是嚴重危害人類健康的口腔頜面部最常見惡性腫瘤之一，在口腔惡性腫瘤中占80%以上。目前雖在很大程度[1-3]上提高了治療水平及治療技術，但總生存率仍低于60%，所以提高口腔鱗癌治愈率，降低死亡率的重點是早期發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治。盡管在研究口腔鱗癌發(fā)病[4,5]機理方面，從基因(DNA)和基因轉錄(mRNA)水平作了眾多的研究,然而是通過其表達的蛋白質來實現(xiàn)基因的功能，若能直接從蛋白質水平研究口腔鱗癌，將使OSCC癌變過程中的分子事件得到更加全面、真實地揭示，為口腔鱗癌的診斷提供新的手段。腫瘤蛋白組學研究技術與傳統(tǒng)的蛋白檢測技術

6、如免疫組織化學法、ELISA及Western等相比，能夠在蛋白的功能和表達方面具有更加全面的研究。因此，高通量的蛋白組學研究技術是研究腫瘤發(fā)生發(fā)展機制的理想平臺。至今腫瘤蛋白質組學研究的主要內容：一方面是腫瘤全蛋白表達譜的創(chuàng)立，用于分離鑒定腫瘤；另一方面是腫瘤與正常細胞的表達差異研究，鑒定各種病損的差異蛋白，建立腫瘤發(fā)生、發(fā)展的蛋白組譜，針對發(fā)現(xiàn)可作為生物標記的組織、血液及唾液中的特異蛋白進行評估，運用于臨床無創(chuàng)傷早期診斷，判斷預后以及尋找新的治療的靶[6,7]標，促進患者生活質量的改善，提高生存率。腫瘤蛋白標記物能作為腫瘤早期發(fā)現(xiàn)、

7、早期診斷的條件之一，即是其被發(fā)現(xiàn)和合理應用。多年來，研究人員不斷致力于腫瘤的特異性標記物的發(fā)掘，其中組織和體液是重點研究方向,而目前關于口腔鱗癌蛋白質組學研究報告多是組織、血清方面的蛋白質組學研究，而其他體液蛋白組學的研究較少。當中唾液作為與口腔鱗癌相關的主要體液之一，其含有口腔組織細胞及其代謝或分泌產(chǎn)物，并且起到潤滑、緩沖、抗菌等諸多作用，而以唾液為中介用于早期診斷其優(yōu)勢明顯:既取樣方便且安全無創(chuàng)，又能反復采集提取，并可用于大規(guī)模的普查篩選等。美國國立牙科和顱頜面研究科學院(NationalInstituteofDentalandC

8、raniofacial[8]Research，NIDCR)于2006年提出了一項重點研究計劃：創(chuàng)立唾液診斷學(salivarydiagnostics)，即在研究健康人唾液中近乎所有蛋白質組分的基礎上，創(chuàng)建以唾液為研究對象