豬傳染性胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌lamp檢測(cè)方法的建立及apxⅳ毒素部分功能研究

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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)所使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生躲筋帶如、尹年6月I7日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱

2、，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容?？诒菊撐牟槐Ｃ??？诒菊撐谋Ｃ?，在一年解密后適用本授權(quán)。研究生簽名：釜：勛聲導(dǎo)師簽名：鄉(xiāng)勻滓★訓(xùn)f年‘月J／日切．炒年‘月7／日萬(wàn)方數(shù)據(jù)摘要／?／IWIINI

3、一片段，并將其連接至pMDl8．T質(zhì)粒成功構(gòu)建克隆載體，再通過(guò)酶切將目的片段連接至pET21a(+)成功構(gòu)建表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化表達(dá)菌BL21，通過(guò)各位表達(dá)條件的優(yōu)化，成功表達(dá)了目的蛋白，經(jīng)過(guò)經(jīng)過(guò)破碎菌體及SDS．PAGE檢測(cè)，蛋白以包涵體的形式表達(dá)。將重組表達(dá)的蛋白進(jìn)行純化、復(fù)性步驟后，經(jīng)Western．blot抗原性分析表明所得到的重組蛋白純度較高且具有良好的反應(yīng)原性。再通過(guò)鹽析的方法提取了APP5型的ApxI、ApxII兩種溶血外毒素。最后，將滅活的含有不同劑量的重組表達(dá)ApxIV與滅活的ApxI、ApxII、滅活菌使用白油為佐劑分別

4、制備疫苗，采取背部多點(diǎn)注射的方式免疫小鼠，再以我國(guó)常見(jiàn)的血清5型的強(qiáng)毒株以10倍于LD50的劑量進(jìn)行攻毒，結(jié)果顯示，各組疫苗中隨著重組ApxIV含量的增加，其免疫保護(hù)率也隨之升高，表明本研究所重組的ApxIV能提供給免疫小鼠對(duì)相同血清型細(xì)菌攻毒一定的免疫保護(hù)作用。綜上所述，重組的ApxIV作為額外成分添加后可增強(qiáng)亞單位疫苗的免疫保護(hù)力，但是，至于是如何提高滅活苗免疫保護(hù)效果的，其機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。關(guān)鍵詞：豬傳染性胸膜放線(xiàn)桿菌；LAMP；ApxIV；免疫保護(hù)萬(wàn)方數(shù)據(jù)ABSTRACTPorcineContagiousPleuropne

5、umoniaiscausedbyActinobacilluspleuropneumoniaeandleadstopleurisyandpneumoniainpigsischaracterizedbyanacuteorchronicdisease．Inrecentyears，thisdiseaseiswidelypopularintheworldoftheindustrializedcountriesinthepig，tobringgreatlosstothepigindustry,islistedasoneofthefivemajor

6、infectiousdiseasetoharmthepigindustryworldwide．Forthepreventionofthisdiseasebycellinactivatedvaccineto，butbecausetheserotypesofAPParenumerous，andeachserotypecrossprotectionbetweenpowerCO．，coupled、ⅣitlltheinactivatedvaccineAPPismissinginthegrowthprocesssecretionoftoxins，

7、thesetoxinshavebeenprovedthattheantigeniccomponentsofAPPimportantprotectiveantigenandinactivatedprocessexistsmoreorlessdamageandloss，inactivatedvaccineinthepreventionofthisdiseaseisnotveryprominenteffect．Therefore，tostudythediseasevaccinehasbecomemanyresearchersincludin

8、gforeign，attention，hasbecomeahotspotinthefieldofinfectiousdiseasesofpigs．Thisstudyisdividedintotwoparts，asfoll