資源描述：
《sirna介導(dǎo)的rrm2沉默對卵巢癌細(xì)胞藥物敏感性的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、siRNA介導(dǎo)的RRM2沉默對卵巢癌細(xì)胞藥物敏感性的影響中文摘要目的探討小于擾RNA(siRNA)介導(dǎo)的核糖核苷酸小亞基M2(RRM2)沉默對順鉑(cDDP)誘導(dǎo)的卵巢癌耐藥細(xì)胞株SKOV3／cDDP藥物敏感性的影響。方法采用間歇濃度梯度遞增法誘導(dǎo)卵巢癌耐藥細(xì)胞株SKOV3／cDDP，至耐藥系數(shù)達(dá)到3以上方可進(jìn)行實驗；用脂質(zhì)體法分別將RRM2基因的特異性siRNA及非特異性siRNA轉(zhuǎn)染SKOV3／cDDP細(xì)胞，另設(shè)未轉(zhuǎn)染組及轉(zhuǎn)染空脂質(zhì)體組做為對照：采用實時定量熒光PCR技術(shù)和蛋白印跡法，分別檢測各處理組細(xì)胞中
2、RRM2基因的mRNA和蛋白的表達(dá)情況；用四甲基偶氮唑藍(lán)比色(MTT)法檢測RNAi對SKOV3／cDDP細(xì)胞藥物敏感性的影響；于轉(zhuǎn)染后24h分剮加入濃度為1099／ml的吉西他濱(Gemcitabine，Gem)和cDDP，用流式細(xì)胞儀檢測不同時間點各組細(xì)胞周期及凋亡情況。結(jié)果(1)成功誘導(dǎo)出卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株SKOV3／cDDP細(xì)胞，其耐藥系數(shù)達(dá)到3，6，屬低度耐藥，但對Gem仍敏感；(2)SKOV3／cDDP細(xì)胞中RRM2基因的表達(dá)水平明顯高于SKOV3細(xì)胞(P=0．000)；轉(zhuǎn)染后24h、48h、72
3、h、96h，SKOV3／cDDP細(xì)胞RRM2mRNA和蛋白的表達(dá)水平均有下調(diào)，其中分別以轉(zhuǎn)染后48h及72h下調(diào)水平最為明顯，分別下調(diào)了約74％并tl92．4％，明顯低于陰性對照組及空白對照組(P<0．05)。(3)11頃鉑對干擾組細(xì)胞的48h半數(shù)抑制濃度(1(250)值明顯低于陰性對照組和空白對照組(P=0．032)。(4)于轉(zhuǎn)染后24h聯(lián)合半數(shù)致死量的Gem及cDDP作用24h、48h、72h、96h后，卵巢癌細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的凋亡，并且細(xì)胞周期出現(xiàn)G1／S期阻滯，其中以作用72h的凋亡率最高(96土3．0
4、)％，與干擾組、干擾組分別聯(lián)合吉西他濱、順鉑作用組，在不同時間點的細(xì)胞凋亡率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。結(jié)論通過RNAi技術(shù)可有效抑制RRM2基因在卵巢癌中的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平，增加順鉑耐藥細(xì)胞的藥物敏感性，并促進(jìn)順鉑誘導(dǎo)的卵巢癌耐藥細(xì)胞凋亡，在一定程度上逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥性；RNAi技術(shù)聯(lián)合吉西他濱及順鉑作用可有效提高卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞的凋亡率，有望成為鉑類耐藥的卵巢癌晚期難治性患者～線治療方案。碩士研究生張夢(婦產(chǎn)科學(xué))指導(dǎo)教師王黎明副教授關(guān)鍵詞：卵巢腫瘤；基因沉默；RNA干擾；耐藥逆轉(zhuǎn)；RRM2青島大學(xué)碩上
5、學(xué)位論文=i翩R剛Ⅵ2sileii醅～!■TheinfluenceofSmallinterferenceRNA．mediatedonthedrugsensitivityofovariancancercellABSTRACTObjective：ToinvestigatetheeffectsofsmallinterferenceRNA(siRNA)一mediatedsilencingoftheribonucleotidereductaseM2subunitfRRM21ontheapoptosisandthedrug
6、sensitivityofcisplatin．resistantSKOV3／13DPcells．Methods：Cisplatin—resistantovariancarcinomacellstrainSKOV3／cDDPwasinducedintermittentlywithincreasingdrugdosage．siRNAtransfectionwasmediatedbylipofectamine2000tosilenceRRM2gene．Un—transfectedcellservedasnegativ
7、econtrols．mRNAandproteinexpression1cvelsofRRM2wereevaluatedbyreal．timePCRandwesternblotaftertransfection．ThecellgrowthinhibitionratewasevaluatedbyMTT．Thecellularapoptoticandcyclingwasidentifiedbyflowc班ometry(FCM)．Results：(1)stablecisplatin—resistantSKOV3／cDD
8、PcellstrainwasestablishedbyculturingwithcDDPfor9monthsandtheresistanceindexesofSKOV3／CDDPrWas3．6．(2)Theexpression1evelofRRM2geneinSKOV3／DDPcellswashigherthanthatintheSKOV3cellsfP=0．000)．Boththem
