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《isecp1介導志賀菌耐藥的分子基礎研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、AdissertationsubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofdoctorStudyontheMolecularBasisofISEcplInvolvedinDrugResistanceinShigel／aByYingfangWangSupervisor：Prof．GuangcaiDuanMedicineCollegeofPublicHealthDec2013學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其
2、他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本聲明的法律責任由本人承擔。學位論文作者：立—較弓日期：扣131年l≯月哆日學位論文使用授權(quán)聲明本人在導師指導下完成的論文及相關(guān)的職務作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學。根據(jù)鄭州大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學可以將本學位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。本人離校后發(fā)表、使用學位論文或與該學位論
3、文直接相關(guān)的學術(shù)論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定。學位論文作者：王凝弓日期：枷I>年I工月f弓日摘要ISEcpl介導志賀菌耐藥的分子基礎研究博士研究生王穎芳導師段廣才教授鄭州大學公共衛(wèi)生學院鄭州450001志賀菌屬細菌又稱痢疾桿菌，是細菌性痢疾(簡稱菌痢)的病原體。菌痢是全球都存在的一個公共衛(wèi)生問題，尤其對發(fā)展中國家造成重大危害。志賀菌屬根據(jù)O抗原分為4個群：分別為痢疾志賀菌、福氏志賀菌、鮑氏志賀菌和宋內(nèi)志賀菌。隨著人們對各種抗生素持續(xù)廣泛的應用，甚至濫用，使志賀菌耐藥現(xiàn)象愈發(fā)嚴重，不但影響臨床療效，而且嚴重增加治
4、療成本和新藥研發(fā)成本，并使新藥應用于臨床的周期縮短。因此，研究志賀菌耐藥機制，進而為志賀菌耐藥的防治提供科學依據(jù)和有效手段，已成為目前的研究熱點。插入序列(IS)是可以獨立存在的遺傳單元，是染色體的特殊組成部分，可以從染色體上的一個位置轉(zhuǎn)移到另一個位置，或在不同染色體問跳躍。最近有學者報道，ISEcpl可能與細菌D．內(nèi)酰胺類抗生素耐藥有關(guān)。目的本課題通過藥物誘導、基因測序等手段，比較志賀菌敏感株誘導前后ISEcpl與blacTx．M的位置關(guān)系及blacvx．M的表達的變化，以闡明ISEcpl誘導轉(zhuǎn)座影響細菌耐藥的分子機制。并進一步收集志賀菌株進行ISE
5、cpl、blacrx．M的分布、頭孢菌素耐藥情況及二者對應關(guān)系的分析，從而對所闡明的機制提供現(xiàn)場佐證。方法1．志賀菌的收集、鑒定：從河南、江西收集志賀菌233株，并進行血清、生化鑒定；2．藥敏試驗：用紙片擴散法測定菌株對所研究抗生素藥敏紙片的抑菌環(huán)，用瓊脂稀釋法測定菌株的最低抑菌濃度；3．頭孢噻吩次抑菌濃度誘導實驗：采用改良K．B法篩選臨床分離、鑒定的志賀摘要菌敏感株，用瓊脂稀釋法測定志賀菌敏感株對頭孢噻吩的最低抑菌濃度，采用頭孢噻吩次抑菌濃度誘導實驗構(gòu)建志賀菌誘導耐藥株；4．全基因組測序分析比較志賀菌敏感株誘導前后差異：Solcxa全基因組測序，并利
6、用Clustal等生物學軟件進行比較、分析；5．ISEcpl轉(zhuǎn)座及對blacrx．M表達的影響：通過PCR、克隆和測序分析比較誘導前后ISEcpl與blacTX-M的位置關(guān)系；并將克隆構(gòu)建質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入感受態(tài)細胞DH5a，K-B瓊脂法對不同轉(zhuǎn)化子進行藥敏試驗及超廣譜B．內(nèi)酰胺酶表型確證試驗，同時做RT．PCR，闡明ISEcpl誘導轉(zhuǎn)座后對blacrx．M的表達的影響；6．ISEcpl與blacTx．M的分布及菌株耐藥情況：PCR檢測所收集志賀菌的ISEcpl與blacTX-M，K．B實驗進行頭孢菌素耐藥性檢測，將耐藥情況與所檢測目的基因進行對應分析。估電；
7、日木1．對志賀菌敏感株mel．sfl998023／zz進行頭孢噻吩次抑菌濃度誘導，最終得到誘導后頭孢噻吩MIC為512mg／L，是誘導前出發(fā)菌株的32倍。2．頭孢噻吩誘導志賀菌敏感株mel．sfl998023／zz的前后，不但對頭孢噻吩的耐藥性發(fā)生了改變，同時測得誘導后菌株對頭孢唑啉、頭孢呋辛鈉、頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢吡肟均由敏感轉(zhuǎn)變?yōu)槟退帯?．頭孢噻吩誘導志賀菌敏感株使其耐藥后，基因組序列發(fā)生了改變，不但有SNV，還造成了新的插入和缺失，且誘導前后菌株插入序列的拷貝數(shù)發(fā)生了變化。4．通過比較志賀菌出發(fā)敏感株與誘導耐藥株的KEGG代謝通路發(fā)現(xiàn)誘導耐藥
8、株比出發(fā)敏感株多一個代謝通路k000930：Caprolactamdegradation，即己
