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《人類免疫缺陷病毒抗體》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、湖南省職業(yè)病防治院作業(yè)指導(dǎo)書標題：人類免疫缺陷病毒抗體（酶聯(lián)免疫法）文件編號版號：第2版編寫：李毅剛審核：批準：2011年月日200年月日200年月日修改記錄修改頁碼修改內(nèi)容修改人批準人生效日期湖南省職業(yè)病防治院作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：標題：人類免疫缺陷病毒抗體（酶聯(lián)免疫法）版號：第1版頁碼1/21、目的用于臨床人類免疫缺陷病毒感染的輔助診斷。2、范圍適用于獻血員篩查與臨床病例。3、職責(zé)檢測人員按照本規(guī)程進行檢測操作。4、原理采用純化基因工程人類免疫缺陷病毒“1”型和“2”型（HIV-1/HIV-2）抗原包被的微孔板和酶標記的HIV-1
2、/HIV-2抗原及其他試劑組成，應(yīng)用雙抗原夾心法原理檢測人血清或血漿中的HIV-1和HIV-2抗體。5、樣本要求5.1僅限于檢測人體血清或血漿。5.2常規(guī)方法采集。5.3血清：采血后，室溫放置1-2小時，待血液凝固，再于3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘。5.4血漿：采血后，樣品與抗凝劑反復(fù)輕搖混勻，再3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘。5.5如果樣品沒有在8小時內(nèi)測定，應(yīng)將其保存于2℃-8℃。如果樣品不能在7天內(nèi)測定，應(yīng)將血清或血漿與血細胞分離，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。6．分析系統(tǒng)6.1分析儀器：ThermoMk3型酶標儀，檢測波長450
3、nm，參考波長630nm。6.237℃恒溫箱。6.3振蕩器用于樣品、試劑的混勻。6.4微量加樣槍。6.5試劑準備：試劑盒于冰箱保存，使用前應(yīng)取出置37℃。取試劑盒內(nèi)洗滌液用蒸餾水作25倍稀釋，置洗瓶中備用。??6.6質(zhì)控試劑：-20℃保存，溶解后隨試劑一起冷藏，每天隨樣品一起檢測并保存質(zhì)控結(jié)果，每月一次質(zhì)控小結(jié)，失控要有記錄及糾正的結(jié)果。7、分析步驟7.1樣品編號：從6號開始編號。7.2設(shè)陰性對照3孔，Anti-HIV-1陽性對照1孔，Anti-HIV-2陽性對照1孔，分別加入陰、陽對照各50微升。7.3每個標本待測孔加入標本血清5
4、0微升，充分混勻，封板，置37℃孵育60分鐘。7.4手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置30~60秒，甩干，重復(fù)6次后拍干。7.5每孔加酶標工作液50微升，充分混勻，封板，置37℃孵育30分鐘。7.6手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置30~60秒，甩干，重復(fù)6次后拍干。7.7每孔加顯色劑A液，顯色劑B液各50微升，充分混勻，封板，置37℃孵育10分鐘。7.8每孔加入終止液50微升，混勻。7.9選取相應(yīng)的程序號，用酶標儀雙波長比色。8、計算Cutoff值=陰性對照平均A值+0.15。9、參照區(qū)間9.1陰性對照A值
5、應(yīng)≤0.129.2Anti-HIV-1陽性對照A值應(yīng)≥0.89.3Anti-HIV-2陽性對照A值應(yīng)≥0.810.臨床意義樣品A值≥臨界值為HIV抗體陽性樣品A值＜臨界值為HIV抗體陰性11.注意事項11.1從冷藏環(huán)境中取出試劑盒應(yīng)置37℃平衡30分鐘后方可使用，余者應(yīng)按前述方法保存和使用。在平衡試劑的同時，待測樣品需置室溫平衡30分鐘后再行測試。11.2使用前試劑應(yīng)搖勻。11.3須確保樣品加樣量準確，如果加樣量不準確，可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果，建議使用微量移液器加所有組份；用滴瓶滴加時，應(yīng)先棄去1~2滴，垂直勻速地滴加。避免在加樣過程
6、中，將液體接觸到或濺到微孔邊緣上。11.4封片不能重復(fù)使用。11.5結(jié)果判斷須在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成。11.6不同批號的試劑不可混用。11.7本試劑盒應(yīng)視為有傳染物質(zhì)，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。12.支持性文件12.1全國臨床檢驗操作規(guī)程（第3版）12.2劉錫光，祁自柏等，病毒性肝炎實驗診斷學(xué)。人民衛(wèi)生出版社，1999,35712.3李金明，等。臨床酶免疫測定技術(shù)。人民軍醫(yī)出版社，2005,8712.4人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒說明書
