黃瓜疫霉菌拮抗菌株的篩選、鑒定及拮抗物質(zhì)的初步分析

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1、．．碎．．．顏誇式難議鑛鑛馨一‘說(shuō)又灌靖霸‘＇‘＇．：．．滬‘．與毎巧．Ｖ３戀Ｉ；權(quán)難誦觀戀＂；－；．：馬Ｖ．ｙ冀誘ｆ讀鑛謙譯扉．，嚴(yán)．謹(jǐn)霞議Ｉ＾＾．．：．帶，＇；＾；，；；顯範(fàn)議戀顏＇＇？ｙ叢稻奢編議‘＇．：Ｎ某‘．心畝叫．＇叫ｒ去打苗．可畝’：碩女學(xué)位論文Ｖ－Ｖ－＇？＇＇、＇＇．．，？占ｒ及括抗物殻的初步分析－－＇Ｖ－；；記興議；人．，，，，逆錢’；產(chǎn)＇＇．／化識(shí)靖族點(diǎn)．＇：ｖ記．．．．－．．．產(chǎn)．Ｖ：＊ｆ．．ｙ?wèi)簦崳?，；＇：ｆ、－一妹．＇；礦Ｖ’、＂

2、’Ｖ‘－。；＇＾’■．＂＞＇Ｖ：、Ｖ?。薇R＼，苗＇＇＇．．．＇．Ｙｒ巧：；．；，；，二；，；斟ｉｌｉｌｌｉ觀研究生姓名孫莉指導(dǎo)教師易圖永教授．學(xué)科專＇業(yè)誦病理學(xué)￣巧１ＷＢＨＩ研究方巧植物病害生ｔｉ防治—‘．．藝．Ｖ也尊！分類號(hào)密級(jí)公開(kāi)ＵＤＣ單位代碼１０５３７綱齋《朵乂＃碩壬學(xué)位論文黃瓜疫霉菌括抗菌株的篩選、鑒定及括抗物質(zhì)的初步分析ＳｃｒｅｅｎｉｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢｉｏｃｏｎｔｒｏｌＡｅｎｔｓｇｇＡａｉｎｓｔＰｈｔｏｈｔｈｏｒａ

3、ｍｅｌｏｎｉｓａｎｄｒｅｌｉｍｉｎａｒｇｙｐｐｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆｉｔｓＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＳｕｂｓｔａｎｃｅ研究生姓名孫莉指導(dǎo)教師易圖永教授學(xué)科專業(yè)植物病理學(xué)研究方向植物病害生物防治論文答辯日期２０１５．０６．１０鐵綾齡鋪劉勇論文評(píng)閱人肖放華、梁滿中、肖啟明二—０五年五月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在指導(dǎo)教師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)或

4、其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料一。與我同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。?！叮蹋希?；ＯＳ年研究生簽名：和４時(shí)間月＾日、關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明本人完全了解湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，目Ｐ；學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可Ｗ采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)可Ｗ用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，并同意將由此產(chǎn)生的收益捐贈(zèng)給學(xué)校教育基金會(huì)用于發(fā)展研究生教育。（保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)

5、遵守此協(xié)議）０占研究生簽名：抑凍時(shí)間；山月日）食年ｊｙ＾１廣指導(dǎo)教師簽名；時(shí)間：７年６月ク日摘要摘要黃瓜疫?。ǎ茫酰悖酰恚猓澹颍牐穑瑁簦铮穑瑁簦瑁铮颍幔牐猓欤椋纾瑁簦┦屈S瓜疫霉菌（Ｐ砂辟ｍｅ／ｏＨｉｓ）引起一的種對(duì)黃瓜影響較大的±傳病害，嚴(yán)重影響了黃瓜的生長(zhǎng)、產(chǎn)量及品質(zhì)。目前化學(xué)防治效果不佳且存在生態(tài)安全問(wèn)題。因此，篩選、利用有益微生物及其代謝產(chǎn)物來(lái)防治黃瓜疫病是實(shí)施綠色植保的有效措施。本研究將從±壤中分離到的細(xì)菌和放線菌與黃瓜疫霉菌進(jìn)行對(duì)時(shí)培養(yǎng)，篩選到２株對(duì)黃瓜疫霉菌有明顯括抗作用的生防菌株，對(duì)這２株茵株進(jìn)行了培養(yǎng)性

6、狀、生理生化和分子生物學(xué)鑒定，并對(duì)其中１株枯抗菌進(jìn)行發(fā)酵優(yōu)化和抑菌活性物質(zhì)初步分析。主要研究和結(jié)果如下：（１）采用±壤稀釋法，從采自湖南、北京等地的王壤樣品中分離得到２６９株放線菌和細(xì)菌。Ｗ黃瓜疫霉菌為祀標(biāo)菌，通過(guò)平板對(duì)時(shí)培養(yǎng)法，巧步篩選到７株對(duì)黃瓜疫霉菌有明顯措抗作用的微生物菌株。經(jīng)過(guò)發(fā)酵液稀釋５倍后復(fù)篩，發(fā)現(xiàn)放線菌Ｘ５４菌株和細(xì)菌Ｐ３菌株對(duì)黃瓜疫霉菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率達(dá)到７０％Ｗ上。此外，放線菌Ｘ５４對(duì)辣椒炭痘病菌、煙草黑腔病菌、水稻紋枯病菌、小麥赤霉病菌、相橘炭誼病菌、黃瓜枯萎病菌等都有一定的抑制作用。（２）通過(guò)對(duì)括抗茵株Ｘ５４

7、和Ｐ３的培養(yǎng)性狀、生理生化特性進(jìn)行研究，Ｗ及利用ＰＣ民技術(shù)從基因組ＤＮＡ中擴(kuò)增１６ＳｒＲＮＡ序列，并結(jié)合生物信息學(xué)方法進(jìn)行分化初步認(rèn)為，放線菌Ｘ５４為弗吉尼亞鏈霉菌（化卿ｏ／ｎｙｃｗＶ咕其１６ＳｒＲＮＡ的登錄號(hào)■化ＫＭ０７８９２６細(xì)菌Ｐ３為地衣芽抱桿菌（５化加＂５：沁《／７７？，ＳｒＲＮＡ的登錄號(hào)；抑句其１６ＫＪ８７２５３８。（３）對(duì)枯抗菌Ｘ５４進(jìn)行發(fā)醇條件優(yōu)化，首先對(duì)培養(yǎng)基優(yōu)化，確定其碳氮源的配方：麥芽糖２０．０ｇ／Ｌ、蛋白胳３．０ｇ／Ｌ。再對(duì)發(fā)酵條件進(jìn)行單因素Ｗ及響應(yīng)面試驗(yàn)，最終確定°對(duì)放線菌Ｘ５４的發(fā)酵條件為：種齡３７ｈ、溫度２

8、８Ｃ、轉(zhuǎn)速