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1、密級(jí):論文編號(hào)：中囯農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文流產(chǎn)衣原體MIP蛋白的雙抗原夾心ELISA診斷方法建立及單克隆抗體制備EstablishofDoubleAntigensSandwichELISABasedonChlamydiaabortusMIPandPreparationofMonoclonalAntibodies碩士研究生：藺俊麗指導(dǎo)教師：周繼章副研究員申請(qǐng)學(xué)位類別：獸醫(yī)碩士專業(yè)領(lǐng)域名稱：獸醫(yī)培養(yǎng)單位：蘭州獸醫(yī)研究所研究生院2015年5月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中
2、特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料5與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：戈崎時(shí)間：謂J年J月((日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或
3、部分內(nèi)容。研究生簽名:商姻中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文評(píng)閱人、答辯委員會(huì)簽名表論文題目流產(chǎn)衣原體MIP蛋白的雙抗原夾心ELISA診斷方法建立及單克隆抗體制備動(dòng)物疫苗與論文作者藺俊麗專業(yè)研究方向分子免疫學(xué)指導(dǎo)教師周繼章培養(yǎng)單位（研;究所）蘭州獸醫(yī)研究所碩（博）姓名職稱單專業(yè)簽名導(dǎo)師評(píng)碩導(dǎo)口西北農(nóng)林科技大學(xué)于三科教授預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)5/閱碩導(dǎo)以人涂亞斌教授哈爾濱獸醫(yī)研究所預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)口答辯主席碩導(dǎo)口魏鎖成教授西北民族大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)CL/碩導(dǎo)口楊孝樸教授甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)以碩導(dǎo)口魏鎖成教授西北民族大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)P答碩導(dǎo)口景
4、濤教授蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)博導(dǎo)S/辯碩導(dǎo)口中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州蔡建平研究員預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)獸醫(yī)研究所委碩導(dǎo)口中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州朱啟運(yùn)研究員預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)□/獸醫(yī)研究所員碩導(dǎo)口中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州劉光遠(yuǎn)研究員預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)E/獸醫(yī)研究所碩導(dǎo)口中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州劉永生研究員預(yù)防獸醫(yī)學(xué)會(huì)議記錄（秘書）論文答辯時(shí)間地點(diǎn)2015年5月13日于蘭州獸醫(yī)研究所綜合樓五樓會(huì)議室密級(jí):論文編號(hào):中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文流產(chǎn)衣原體MIP蛋白的雙抗原夾心ELISA診斷方法建立及單克隆抗體制備EstablishofDoubleAntigensSandwichELISAB
5、asedonChlamydiaabortusMIPandPreparationofMonoclonalAntibodies碩士研究生：藺俊麗指導(dǎo)教師：周繼章副研究員申請(qǐng)學(xué)位類別：獸醫(yī)碩士專業(yè)領(lǐng)域名稱：獸醫(yī)培養(yǎng)單位：蘭州獸醫(yī)研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationEstablishofDoubleAntigensSandwichELISABasedonChlamydiaabortusMIPandPreparationofMono
6、clonalAntibodiesM.S.Candidate：LinJun-liSupervisor：AssociateProf.ZhouJi-zhangDegree：MasterofVeterinarianSpecialty:VeterinaryMay2015摘要流產(chǎn)衣原體（Chlamydiaabortus，C.abortus）是一種嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性細(xì)菌，可感染妊娠母畜導(dǎo)致流產(chǎn)、死產(chǎn)或者弱胎等；也可引起公畜發(fā)生睪丸炎、尿道炎等癥狀；孕婦與感染的動(dòng)物直接接觸也會(huì)造成流產(chǎn)及全身感染等癥狀，因此流產(chǎn)衣原體是一種重要的人獸共患病
7、病原。巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)蛋白（MacropHageInfectivityPotentiator，MIP)是一種脂蛋白，作為一種免疫顯性抗原，參與衣原體感染，引起炎癥反應(yīng)等過程。本研究以MIP為研究對(duì)象，利用GenBank已公布的序列，設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增得到MIP蛋白的編碼基因，經(jīng)過酶切、連接、轉(zhuǎn)化將其插入原核表達(dá)載體pET30a（+），成功構(gòu)建表達(dá)載體pET-mip并轉(zhuǎn)化入E.coliBL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)，經(jīng)SDS-PAGE分析可見在27kD處出現(xiàn)特異性條帶，表明插入的mip基因成功表達(dá)；Western-blot特異性實(shí)驗(yàn)
8、驗(yàn)證表達(dá)的MIP蛋白具有反應(yīng)原性。以純化的MIP蛋白做為包被抗原，HRP標(biāo)記的MIP蛋白為酶標(biāo)抗原，最適包被濃度為2.5μg/mL，血清最佳稀釋度為1:100，建立雙抗原夾心ELISA方法。建立的雙抗原ELISA與IHA相比，敏感性高，符合率為89
