肺結核病人dna低甲基化趨勢與dna去甲基化酶的相關性研究

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1、中＠聲３鐘《版碩±研究生學位論文■北京協(xié)和醫(yī)學院研究生院中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院碩±學位論文學校代碼：１００２３學號：Ｓ２０１２０３５００４碩±學位論文肺結核病人ＤＮＡ低甲基化庭勢與ＤＮＡ去甲基化巧的相巧性研究所院：中國醫(yī)學科學院病原生物學研究所姓名：張洪靜指導教師：劉海鷹副研究員導師小組：劉海鷹副研巧員學科專業(yè)：免疫學研究方向；肺結核病人宿主基因甲基化影響因素的研究完成日期：２０１５．０５中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院碩

2、±學位論文目錄摘要１Ａｂｓｔｒａｃｔ３縮略減５６引言－、肺結核病面臨新的挑戰(zhàn)，宿主免疫應答能力與肺結核病的密切關聯(lián)是戰(zhàn)勝新挑戰(zhàn)的ｎｍ７二、ＤＮＡ甲基化對宿主免疫系統(tǒng)起著重要調節(jié)作用１０Ｓ、課題姐在前期實驗中發(fā)現(xiàn)肺結核病人呈現(xiàn)ＤＮＡ低甲基化趨勢１１四、ＤＮＡ甲基化水平受ＤＮＡ去甲基化酶及ＤＮＡ甲基化轉移酶調控１２於１７第一部分１７活動性肺結核病人及健康人全血ＲＮＡ中ＤＮＡ去甲基化酶及ＤＮＡ甲基化轉移酶表達量的分ｔｆ

3、１７一、實驗材料和方法１７二、實驗結果２３三、小結２５第二部分２６５４９－體外刺激Ａ、Ｂｅａｓ２Ｂ細胞探討ＤＮＡ去甲基化酶及ＤＮＡ甲基化轉移酶對ＤＮＡ低甲基化趨勢的影響２６一２６、實驗材料和方法二、實驗結果３３Ｈ、小結３８職３９一、肺結核病人ＤＮＡ去甲基化酶影響ＤＮＡ低甲基化趨勢的相關性分析３９二、肺結核病人的低甲基化趨勢可能通過増強免疫應答來影響疾病的發(fā)生發(fā)展４０Ｈ、ＤＮＡ去甲基化酶及ＤＮＡ甲基化轉移酶在同種刺激物刺激過的不

4、同細胞中差異表達的趨勢及種類不同４１ＩＳ論４２中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院碩±學位論文參考女獻４３致謝４９獨創(chuàng)性聲明和學位論文版權使用授枚４８中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院碩±學位論文搞要肺結核?。ǎ穑酰欤恚铮睿幔颍牐簦酰猓澹颍悖酰欤铮螅椋?，ＰＴＢ）是由結核分枝桿菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ一ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＡ）感染引起的，Ｍ種與機體細免疫應答密切相關的慢性感染性疾病，在肺結核病的發(fā)病過程中，細胞介導的抗原特異性免疫應答發(fā)揮著重要作

5、用。當結核分枝桿菌感染機體時，抗原遞呈細胞（ＡｎｔｉｇｅｎｒｅｓｅｎｔｉｎｃｅｌｌｓＡＰＣ）將結核分枝ｐｇ，－－ＣＤ８０雙途徑激活Ｔ淋己細胞桿菌抗原通過抗原ＭＨＣ分子復合物和ＣＤ２８，同時一－１２－－分泌正、正１等細胞因子，進步刺激免疫細胞釋放效應分子如ＴＮＦａ等Ｗ殺滅結核分枝桿菌。ＤＮＡ甲基化修飾作為動植物體內一種重要的表觀遺傳修飾形式，參與免疫應答反應的調控，對腫瘤性疾病、慢性感染性疾病、自身免疫性疾病等多種疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。而ＤＮＡ甲基化主要通過ＤＮ

6、Ａ甲基化轉移酶（ＤＮＡｍｅ也ｒａｎｓｆｅｒａｓ的ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、ＤＮＭＴ犯）上調ＤＮＡ甲基化水平ｙｈ，；通過ＤＮＡ去甲基化酶（ＴＥＴ１、ＴＥＴ２、ＴＥＴ３、ＴＤＧ）下調ＤＮＡ甲基化水平，兩方面的調節(jié)共同維持ＤＮＡ甲基化水平的高低。課題組在前期通過全基因姐ＤＮＡ甲基化芯片研究發(fā)現(xiàn)，肺結核病患者宿主基因普遍呈低ＤＮＡ甲基化狀態(tài)一ＤＮＡ甲基。為進步探索肺結核病人化調節(jié)的分子機制、研究肺結核病人ＤＮＡ低甲基化狀態(tài)的影響因素，本研究在前期研巧結果的基礎上，收集健康對照（Ｙ干

7、擾素釋放實驗，即ＩＧＲＡ陰性）和活動性肺結核病人治Ｒｅａ－療前全血ＲＮＡ，通過實時巧光定量ＰＣＲｌｔｉｍｅＰＣＲ方法，首先對參與ＤＮＡ甲（）基化下調的ＤＮＡ去甲基化酶的４個基因進行定量檢測，Ｗ初步明確ＤＮＡ低甲基化狀態(tài)與ＤＮＡ去甲基化酶之間的關系。結果發(fā)現(xiàn)，在肺結核病人組中，參與下調ＤＮＡ甲基化水平的４個基因（ＴＥＴ１、ＴＥＴ２、ＴＥＴ３、ＴＤＧ）表達均顯著升高（Ｐ值＜０．０５）。為了全面探討肺結核病人ＤＮＡ低甲基化狀態(tài)的影響因素，我們又對可Ｗ被動影響ＤＮＡ低甲基化狀態(tài)的ＤＮ

8、Ａ甲基化轉移酶的３個基因（ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、ＤＮＭＴ３Ｂ）進行了定量檢測，結果發(fā)現(xiàn)：只有ＤＮＭＴ１表達顯著升高（Ｐ值＜０．０５）。一為了進步驗證７ＲＶＡ甲５－，我們利用Ｈ３裂解抗原Ｗ及體外降低ＤＮ基化水平的氮雜胞嚼巧核巧（５ａｚａｃ－２Ｂ）刺激物刺激Ａ５４９、Ｂｅａｓ兩種細胞系，并收集刺激后不同時間點細胞ＤＮＡ、ＲＮＡ。利用甲基化敏感性限制性分析（ＭＳＲＡ）對所收集ＤＮＡ樣本進行分析，結果表明，擬７Ｒｖ抗原、５ａｚａｃ導致ＤＮ