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《紫花玉簪愈傷組織的誘導及農桿菌介導遺傳轉化體系的建立》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、分類號：單位代碼：10193密級：學號：2012208碩士學位論文紫花玉簪愈傷組織的誘導及農桿菌介導遺傳轉化體系的建立StudiesonCallusinductionandtheestablishmentofagrobacteriummediatedgenetictransformationsystemofHostaventricosa作者姓名：徐麗萍學位類別：理學碩士專業(yè)名稱：生物化學與分子生物學研究方向：生物大分子結構與功能指導教師：劉洪章所在學院：生命科學學院2015年5月獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文是本人在導師指
2、導下，獨立進行研究所取得的成果。盡我所知，除文中特別加以標注和致謝所列內容外，論文中不包含其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得吉林農業(yè)大學或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。本學位論文所有內容若有不實之處，本人愿意承擔一切相關法律責任和后果。學位論文作者簽名：簽字日期：年月日關于學位論文使用授權的聲明1、本人完全了解吉林農業(yè)大學有關保留和使用學位論文的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學位期間所完成的論文及相關成果的知識產權屬吉林農業(yè)大學
3、所有，并同意將本論文的版權授權給吉林農業(yè)大學，學校有權保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。2、本人（同意/不同意，務必打印后填寫）吉林農業(yè)大學將本論文版權授權給不同媒體進行電子出版、多媒體出版、網絡出版以及其他形式出版（涉密學位論文解密后應遵守此協議）。3、本人聲明畢業(yè)后若發(fā)表在攻讀研究生學位期間完成的論文及相關的學術成果，必須以吉林農業(yè)大學作為第一署名單位。學位論文作者簽名：簽字日期：年月日指導教師簽名：簽字日期：年月日摘要紫花玉簪(Hostaventricosa
4、)又稱紫萼、紫玉簪。屬百合科玉簪屬多年生宿根草本植物，紫花玉簪不僅花、葉具有觀賞價值，還具有很強的適應性，栽培管理較容易，因此近些年在國內外已成為隨處可見的林下地被植物，可謂是綠化的新寵。此外，紫花玉簪還具有一定的食用和藥用價值[1]，然而目前國內外所有玉簪品種都存在著單花花期短,花色僅限制在白色花和紫色花兩種，且有缺乏香氣，繁殖系數低、周期長等缺陷。以往通過傳統(tǒng)雜交育種對玉簪新品種進行選育,但由于育種周期長和物種局限性的影響很多性狀通過傳統(tǒng)育種方式和很難獲得。例如只能改變玉簪葉子的性狀（大小、高矮、形狀、產生嵌合體等），而玉簪的花
5、色除白色紫色外沒培育成其他顏色，轉基因技術可以很好的克服這些缺點,為改良和修飾花卉性狀提供了一條捷徑，現在對玉簪組織培養(yǎng)擴繁研究報道較多，但以玉簪為外植體進行轉基因方法的研究還未見報道。本研究選用紫花玉簪為實驗材料，并通過組織培養(yǎng)技術和農桿菌介導法進行了愈傷組織的誘導、增殖及遺傳轉化的研究，得出了不同外植體誘導愈傷組織、增殖所需的不同激素種類及適宜的濃度。從不同轉化受體，農桿菌侵染濃度，侵染時間，乙酰丁香酮(AS)濃度,侵染方式等因素進行探索，本實驗篩選出了最佳轉化條件，建立了基因轉化體系，為基因工程育種定向培育玉簪新品種奠定良好的
6、基礎。1.不同外植體愈傷組織的誘導及增殖以葉片、葉柄、花梗、腋芽為外植體進行愈傷組織的誘導，花梗是最佳誘導愈傷的外植體，其愈傷誘導率最高為91%。最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0+NAA0.3(單位mg/L)。愈傷增殖最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0+NAA0.4+2,4-D0.2(單位mg/L),增殖率最高可達95%。2.研究了影響遺傳轉化的因素，優(yōu)化了轉基因體系。以紫花玉簪的愈傷組織，花梗，幼芽，為轉化受體，通過滴加和浸泡兩種侵染方式將攜有pCAMBIA3300-GUS的農桿菌EHA105菌株侵染轉化受體，最佳草銨膦篩選濃度40
7、0mg/L，對轉化條件進行篩選：浸泡侵染方式最佳轉化受體為愈傷組織，最佳侵染時間為10min，最佳侵染菌液濃度（OD600）為0.6，最佳乙酰丁香酮濃度(AS)為150μmol/L，滴加侵染方式最佳轉化受體為愈傷組織，最佳侵染菌液濃度（OD600）為0.4，最佳乙酰丁香酮濃度(AS)為100μmol/L。兩種侵染方式進行分析比較，滴加方式得出的轉化率要高于浸泡方式所得轉化率。3.對抗性篩選培養(yǎng)后的植株進行PCR檢測和GUS染色檢測關鍵詞：紫花玉簪，組織培養(yǎng)，農桿菌介導，遺傳轉化IAbstractHostaventricosa,als
8、oknownascalyxpurple,purplehost.itisLiliaceaehostperennialperennialrootherb,H.purpleflowersandleavesnotonlyhavetheorna
