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《農(nóng)桿菌介導(dǎo)phyA基因轉(zhuǎn)化玉米愈傷組織培養(yǎng)體系的優(yōu)化.doc》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、農(nóng)桿菌介導(dǎo)phyA基因轉(zhuǎn)化玉米愈傷組織培養(yǎng)體系的優(yōu)化摘要：以根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium)EHA105介導(dǎo)外源基因phyA轉(zhuǎn)入玉米(ZeamaysL.)自交系GS01的胚性愈傷組織，并利用除草劑(草胺磷)篩選出抗性愈傷組織，培養(yǎng)并獲得再生植株。結(jié)果表明，菌液濃度及侵染時間顯著影響愈傷組織的轉(zhuǎn)化率；不同激素種類及配比對抗性愈傷組織再生植株的影響明顯。當(dāng)菌液濃度0D600nni為0.6,侵染時間為20min時，抗性愈傷組織的轉(zhuǎn)化率最高，達(dá)到了68.7%,為玉米農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化并獲得再生植株奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：農(nóng)桿菌(Agrobacterium);玉米(Zeamay
2、sL.)自交系；遺傳轉(zhuǎn)化;phyA基因中圖分類號：S513.032文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：0439-8114(2015)02-0465-03D0I：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.02.054OptimizingConditionsofTransform!ngphyAGeneintoMaizewithAgrobacteriumXUDan-dana,WANGPi-wub,ZHAOHan-dana,LIUShuanga,CHENGZhao-tinga,GUANShu-yana(a.CollegeofLifeSciences;b.C
3、ollegeofAgronomy,JilinAgriculturalUniversity,Changchun130118,China)Abstract：ForeigngenephyAwastransferedtoembryoniccallusofmaizeinbredlinesGS01withAgrobacteriumEHA105-mediated.Herbicides(alachlorP)wereusedtoscreenresistant,callusandregenerateplantlets.Theresultsshowedthatbacteriaconce
4、ntrationandinfectiontimeaffectedcallusconversionratesignificantly.Typesofhormoneandproportionaffectedobviouslyregenerationplantletofresistantcallus.Bacteriaconcentrationwas0.6at0D600nm.Infectiontimewas20min.Resistantcallusratewashighwith68.7%.Itwi11provideagoodreferencefortheregenerat
5、ionandtransformationofmaizemediatedbyAgrobacterium.Keywords:Agrobacterium;maizeinbredlines;genetictransformation;phyAgene玉米(ZeamaysL.)是糧食作物中重要的工業(yè)原料，在全世界糧食生產(chǎn)中占有舉足輕重的地位[1-3]。2010年，我國玉米種植面積達(dá)到了324萬而2,成為世界第二大玉米生產(chǎn)國，而玉米也成為了我國的“谷物之王”[4]0玉米在我國經(jīng)濟(jì)生產(chǎn)中占有重要地位，因此大力提高玉米的產(chǎn)量及品質(zhì)，成為了眾多學(xué)者積極探尋的問題[5-7]o植酸酶能
6、有效地水解食物以及土壤中植酸態(tài)有機(jī)磷，釋放出生命體可以直接吸收利用的無機(jī)磷酸及其鐵、鈣、鋅、鎂等鹽類，有效地提高了其生物利用率。因此，植酸酶基因克隆及導(dǎo)入受體組織并獲得可再生植株對研制植酸酶食品或飼料添加劑、開發(fā)高級保健食品和優(yōu)質(zhì)飼料、循環(huán)利用土壤中有機(jī)磷、緩解全球性磷礦產(chǎn)資源危機(jī)等具有重要意義[8-13]o木研究以玉米自交系GS01的胚性愈傷組織為材料，將連有根部特異性啟動子和植酸酶基因phyA的載體轉(zhuǎn)入玉米自交系中，對影響農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玉米遺傳轉(zhuǎn)化的因素進(jìn)行探討，從而確定了農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化的最佳菌液濃度及最佳侵染時間，優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)卡米遺傳轉(zhuǎn)化條件，并成功獲得玉
7、米抗性苗，為基因工程育種打下了基礎(chǔ)，為獲得含有PhyA基因的轉(zhuǎn)基因玉米植株提供了條件，同時為進(jìn)一步提高玉米的產(chǎn)量及品質(zhì)的研究奠定了基礎(chǔ)。1材料與方法1.1材料1.1.1外植體采用玉米自交系GS01的胚性愈傷組織作為遺傳轉(zhuǎn)化的受體進(jìn)行轉(zhuǎn)化，由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生物技術(shù)中心實(shí)驗(yàn)室提供。1.1.2菌種含有phyA基因和玉米根部特異啟動子基因構(gòu)建的重組質(zhì)粒pCAMBTA3301-ZmGLUlP-PhyA-Nos的根癌農(nóng)桿菌EHA105,由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生物技術(shù)中心實(shí)驗(yàn)室保存并提供。1.1.3培養(yǎng)基木試驗(yàn)所用的培養(yǎng)基見表1。1.2方法1.2.1抗性愈傷篩選標(biāo)記的確定本研究所構(gòu)建的表
8、達(dá)載體為B
