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《殺松材線(xiàn)蟲(chóng)海洋真菌h-21的分離鑒定、培養(yǎng)條件及其活性物質(zhì)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類(lèi)號(hào)：Q936密級(jí)：不保密UDC：579學(xué)校代碼：11065碩士學(xué)位論文殺松材線(xiàn)蟲(chóng)海洋真菌H-21的分離鑒定、培養(yǎng)條件及其活性物質(zhì)研究李子指導(dǎo)教師郭道森學(xué)科專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)微生物學(xué)論文答辯日期2015年6月6日殺松材線(xiàn)蟲(chóng)海洋真菌H-21的分離鑒定、培養(yǎng)條件及其活性物質(zhì)研究摘要松萎蔫病（pinewiltdisease，PWD)是松樹(shù)病害中的一種毀滅性的病害，對(duì)全球松林構(gòu)成了巨大的威脅。針對(duì)松萎蔫病的病原生物松材線(xiàn)蟲(chóng)，本文對(duì)采自青島附近海域的樣品進(jìn)行真菌分離，并采用浸漬法對(duì)分離得到的22株真菌的培養(yǎng)濾液進(jìn)行殺線(xiàn)蟲(chóng)活性測(cè)定，從這些菌株中篩選
2、得到了1株具有高殺松材線(xiàn)蟲(chóng)活性的真菌H-21，該菌株分離自貽貝。通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察和18SrDNA序列分析，將菌株H-21鑒定為L(zhǎng)eucostomasp.，用其培養(yǎng)液處理松材線(xiàn)蟲(chóng)72h時(shí)，線(xiàn)蟲(chóng)的校正死亡率可達(dá)90.07%。對(duì)H-21的培養(yǎng)條件進(jìn)行了單因素和正交實(shí)驗(yàn)研究，確定菌株H-21在PD培養(yǎng)基中產(chǎn)生殺線(xiàn)活性物質(zhì)最佳的培養(yǎng)條件是：100%海水濃度，初始pH值6.0，培養(yǎng)溫度25℃，培養(yǎng)時(shí)間5d。對(duì)菌株H-21殺線(xiàn)活性物質(zhì)的穩(wěn)定性進(jìn)行了初步測(cè)定，確定其活性物質(zhì)具有熱穩(wěn)定性以及在弱酸性條件下殺線(xiàn)活性穩(wěn)定的特點(diǎn)。對(duì)菌株發(fā)酵液進(jìn)行殺線(xiàn)活性
3、組分分析，結(jié)果表明菌株培養(yǎng)濾液的乙酸乙酯萃取相具有很強(qiáng)的殺線(xiàn)活性，72h的殺線(xiàn)活性可以達(dá)到100%。利用硅膠柱層析、凝膠色譜柱層析和HPLC等對(duì)乙酸乙酯相進(jìn)行進(jìn)一步分離純化后，得到7種單體化合物，其中一種化合物在其濃度為1.0mg/mL時(shí)殺線(xiàn)活性為80.68%。通過(guò)質(zhì)譜及核磁共振波譜等現(xiàn)代波譜技術(shù)將該化合物確定為fusarentin6,7-methylether，是一種fusarentin類(lèi)殺蟲(chóng)藥物。本研究可為從海洋真菌活性物質(zhì)中開(kāi)發(fā)高效、低毒的微生物源殺線(xiàn)蟲(chóng)劑及其在松萎蔫病防治方面的應(yīng)用提供理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：海洋真菌；培養(yǎng)條件
4、；殺線(xiàn)活性；殺線(xiàn)化合物；松材線(xiàn)蟲(chóng)Isolation,IdentificationandCultureConditionsofMarineFungusH-21withNematicidalActivityagainstPineWoodNematodeandCharacterizationofItsNematicidalSubstancesAbstractPinewiltdisease(PWD),causedbythepinewoodnematode(PWN),Bursaphelenchusxylophilus,isoneofthe
5、mostdevastatingdiseaseofpinetreesandgreatlythreatensglobalforestresources.InordertoscreenthemarinefungalstrainswithhighnematicidalactivityagainstB.xylophilus,twenty-twofungalstrainswereisolatedfromthesamplescollectedfromthesubtidalzonesatQingdaoandtheirculturalfiltra
6、teswereassayedinvitrofornematicidalactivityusingimmersiontest.Itwasfoundthatoneofthesestrains,whichwasdesignatedasstrainH-21andisolatedfromtheintestinesofabluemussel(Mytilusedulis),exhibitedhighestnematicidalactivitywitha90.07%correctedmortalityofB.xylophilustreatedw
7、iththeculturefiltratefor72h.ThestrainH-21wasidentifiedasLeucostomasp.onthebasisofmorphologyand18SrDNAsequenceanalysis.Theresultsfromthesingle-factorexperimentsandorthogonalexperimentshowedthattheoptimalcultureconditionsofthestrainH-21fortheproductionofnematicidalsubs
8、tanceswereusingPDmediumpreparedwith100%seawaterwithinitialpH6.0,andincubatingat25℃for5days.Thedeterminationofphysicalandchemistrypr
