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《精原干細(xì)胞動(dòng)態(tài)標(biāo)記物的初步篩選》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要分類號(hào):R3單位代碼:10752密級(jí):公開學(xué)號(hào):201200209寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文精原干細(xì)胞動(dòng)態(tài)標(biāo)記物的初步篩選Screeningofdevelopmentalmarkersinspermatagonialstemcells學(xué)位申請(qǐng)人:田稼指導(dǎo)教師:馬良宏申請(qǐng)學(xué)位類別:醫(yī)學(xué)專業(yè)領(lǐng)域名稱:外科學(xué)研究方向:精原干細(xì)胞的應(yīng)用基礎(chǔ)研究所在學(xué)院:臨床醫(yī)學(xué)院論文完成日期:二〇一五年三月寧夏醫(yī)科大學(xué)研究生院I寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationof
2、Master’sDegreeScreeningofdevelopmentalmarkersinspermatagonialstemcellsStudent’sName:TianjiaSupervisor:MalianghongSubjectCategory:MedicalScienceMajor:SurgerySpecialty:UrinarysurgerySchool:ClinicalMedicineSchoolCompletionDate:Mar.2015II寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要精原干細(xì)胞動(dòng)態(tài)標(biāo)記物的初步篩選III寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要
3、摘要精原干細(xì)胞移植對(duì)男性不育的治療具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值,尤其對(duì)青春期前接受大劑量化療致生精功能嚴(yán)重受損的非梗阻性無精子癥患者,具有獨(dú)特的臨床應(yīng)用價(jià)值。只要在非梗阻性無精子癥患者睪丸內(nèi)找到精原干細(xì)胞,就有可能促使其增殖分化獲得精子;或通過特異性標(biāo)志物分選,體外獲得純度較高的精原干細(xì)胞用于增殖培養(yǎng)或移植。然而,如何確定所獲得細(xì)胞是精原干細(xì)胞,成為此項(xiàng)工作的首要條件。精原干細(xì)胞在增殖和分化的過程中細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)會(huì)表達(dá)許多蛋白質(zhì),這些蛋白質(zhì)如果有較好的特異性和敏感性,作為精原干細(xì)胞標(biāo)志物,將對(duì)分離及鑒定精原干細(xì)胞發(fā)揮重要作用。我們將不同年齡階段小鼠精原干細(xì)胞
4、采用復(fù)合酶消化、免疫磁珠分選技術(shù)分離純化出后,通過雙向凝膠電泳及蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析技術(shù)動(dòng)態(tài)觀測(cè)各年齡階段精原干細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)的差異,運(yùn)用生物信息學(xué)蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫篩選并確定差異性蛋白質(zhì)或發(fā)現(xiàn)新的蛋白質(zhì)。目的:利用iTRAQ蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析技術(shù)觀測(cè)各年齡階段精原干細(xì)胞(SSCs)蛋白的表達(dá),進(jìn)一步分析SSCs標(biāo)志物表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化,運(yùn)用生物信息學(xué)蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫篩選并發(fā)現(xiàn)新的標(biāo)志物。方法:以健康雄性C57BL/6小鼠為研究對(duì)象,按照年齡段不同分為8組,無菌提取各組小鼠睪丸組織,采用復(fù)合酶消化、免疫磁珠分選的方法純化SSCs后提取蛋白,利用雙向電泳及iTRAQ標(biāo)記蛋白質(zhì)
5、質(zhì)譜分析技術(shù)并結(jié)合蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫對(duì)各組蛋白質(zhì)進(jìn)行分析鑒定。結(jié)果:質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)共得到譜圖248510張,通過Mascot軟件進(jìn)行分析,共鑒定到1132種蛋白。以蛋白豐度差異倍數(shù)達(dá)到1.2倍以上,且經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)P?0.05視為存在差異性蛋白,8組共檢測(cè)到差異蛋白298種。鑒定到目前已知的SSCs標(biāo)志物9種(PCNA、GFRA1、CDH1、AnnexinA7、UCHL1、VASA、CD49f、CD29、PLZf),通過各組對(duì)比獲得在不同年齡段內(nèi)表達(dá)變化趨勢(shì),其中GFRA1、CD49f、CD29在SSCs中的變化IV寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要趨勢(shì)與以往文獻(xiàn)一致,并篩
6、選出10種蛋白質(zhì)(P63、CD71、CD98、K19、ACE、K18、K15、K17、SH2、SH3)作為SSCs標(biāo)志物進(jìn)一步研究的對(duì)象。結(jié)論:SSCs內(nèi)的蛋白隨著機(jī)體年齡的變化表達(dá)存在差異,iTRAQ蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析技術(shù)可以對(duì)SSCs蛋白質(zhì)組學(xué)信息進(jìn)行分析與比較,獲得各年齡階段差異性表達(dá)蛋白,為進(jìn)一步分析和研究這些差異性蛋白的功能與作用提供了新的方法。關(guān)鍵詞:精原干細(xì)胞,蛋白質(zhì)組學(xué),生物標(biāo)記物,同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)ScreeningofdevelopmentalmarkersinspermatagonialstemV寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要c
7、ellsAbstractSpermatogonialstemcellstransplantationhasapotentialclinicalvalueforthetreatmentofmaleinfertility.Especiallyforthosenon-obstructiveazoospermiapatientswithseverelyimpairedspermatogenesis,whichiscausedbyreceivinghigh-doseofchemotherapybeforepuberty,thistechniqueisassocia
8、tedwithauniqueclinicalvalue.Itispossible