基于慈竹轉(zhuǎn)錄組myb轉(zhuǎn)錄因子克隆及其遺傳轉(zhuǎn)化研究

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1、西南科技大學(xué)研究生學(xué)位論文基于慈竹轉(zhuǎn)錄組MYB轉(zhuǎn)錄因子克隆及其遺傳轉(zhuǎn)化研究年級2012級姓名楊傳鳳申請學(xué)位級別碩士專業(yè)植物學(xué)指導(dǎo)教師胡尚連教授ClassifiedIndex:U.D.C:SouthwestUniversityofScienceandTechnologyMasterDegreeThesisCloningandtransformationofMYBtranscriptionfactorsbasedonBambusaemeiensistranscriptomeGrade:2012Candidate:ChuanfengYangAcademicDegreeAppliedf

2、or:MasterSpeciality:BotanySupervisor:ShanglianHuApr.11.2015ˊ獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得西南科技大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。簽名：日期：關(guān)于論文使用和授權(quán)的說明本人完全了解西南科技大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文的復(fù)印件，允許該論文被查閱和

3、借閱；學(xué)?？梢怨荚撜撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)簽名：導(dǎo)師簽名：日期西南科技大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文第I頁摘要慈竹為叢生竹類，屬禾本科竹亞科慈竹屬，其纖維含量高，是西南地區(qū)造紙重要原料，但慈竹本身較高的木質(zhì)素含量及冷凍脅迫、土壤干旱等影響，造成慈竹大面積減產(chǎn)。MYB基因在調(diào)控植物次生細(xì)胞壁合成及響應(yīng)各種非生物脅迫中發(fā)揮重要作用。本研究基于慈竹筍轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫，克隆得到2個MYB基因，并對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析、組織表達(dá)模式分析和脅迫誘導(dǎo)表達(dá)分析及過表達(dá)載體遺傳轉(zhuǎn)化煙草，為通過基因工程手段提高工業(yè)用竹的抗逆性研究

4、和調(diào)控木質(zhì)素生物合成研究提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：1.從100cm高慈竹筍轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中篩選2條MYB序列，設(shè)計全長引物，以轉(zhuǎn)錄組測序用慈竹筍cDNA為模板克隆得到2個MYB全長基因序列，分別命名為BeMYB1和BeMYB2，序列提交至NCBI數(shù)據(jù)庫，其GenBank注冊號分別為KJ496128和KJ496129。2.生物信息學(xué)分析結(jié)果表明，BeMYB1和BeMYB2基因cDNA全長序列分別為2061bp和1142bp，編碼區(qū)分別為1899bp（編碼632個氨基酸)和1017bp（編碼338個氨基酸）。慈竹BeMYB1和BeMYB2基因編碼的蛋白均為親水性蛋白，分別具有1

5、0個和12個磷酸化位點及13個和5個賴氨酸糖基化位點。氨基酸序列分析表明，BeMYB1基因編碼蛋白C端具有一個MYB結(jié)構(gòu)域，與小麥TaMYB48具有較高的相似性，均具有2個保守的motif1和motif2基序，屬于MYB相關(guān)蛋白；而慈竹BeMYB2基因編碼蛋白在N端具有2個MYB結(jié)構(gòu)域，屬于R2R3-MYB蛋白亞族，與毛竹PeMYB2和水稻OsMYB18聚為一支，均具有3個保守的motif1、motif2和motif3基序。3.采用Real-timePCR技術(shù)對慈竹MYB基因的組織表達(dá)模式進(jìn)行分析，結(jié)果表明，慈竹BeMYB1和BeMYB2在慈竹筍、葉、莖部位均表達(dá)，屬于組成型表

6、達(dá)，但二者的表達(dá)量均在成熟的組織中較高，BeMYB1主要在莖下部表達(dá)，BeMYB2主要在展開葉和未展開葉中表達(dá)，而幼嫩的筍中表達(dá)量均很低，且BeMYB2基因在各部位的表達(dá)量較BeMYB1高。–1–1)4.對慈竹幼苗進(jìn)行ABA(200μmol?L)、NaCl(200mmol?L、PEG6000(20%)脅迫處理，通過Real-timePCR技術(shù)對BeMYB1和BeMYB2基因進(jìn)行脅迫誘導(dǎo)差異性表達(dá)分析。結(jié)果表明，與對照相比，短時間內(nèi)同一種非生物脅迫下，BeMYB2基因的表達(dá)量變化幅度較BeMYB1基因大，尤其是干旱脅迫。因此，推測BeMYB1和BeMYB2基因可能在應(yīng)答ABA、高

7、鹽脅迫、干旱西南科技大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文第II頁的脅迫時發(fā)揮重要作用。5.構(gòu)建了BeMYB1和BeMYB2的植物過表達(dá)載體pCAMBIA1303-BeMYB1和pCAMBIA1303-BeMYB2，并將pCAMBIA1303-BeMYB1和pCAMBIA1303-BeMYB2載體成功轉(zhuǎn)化煙草，均得到轉(zhuǎn)基因煙草植株。轉(zhuǎn)基因植株的初步分析結(jié)果表明，與CK相比，pCAMBIA1303-BeMYB1轉(zhuǎn)基因株開花延遲、莖桿粗壯、植株較高，木質(zhì)部較寬，木質(zhì)素含量降低；而pCAMBIA1303-BeMY