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《初步探討腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因tmsg-1入核機(jī)制及檢測(cè)其在人前列腺癌中表達(dá)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號(hào)：R730.2密級(jí)：不保密UDC：616學(xué)校代碼：11065碩士學(xué)位論文初步探討腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因TMSG-1入核機(jī)制及檢測(cè)其在人前列腺癌中表達(dá)李敬敬指導(dǎo)教師項(xiàng)鋒鋼教授學(xué)科專業(yè)名稱病理學(xué)與病理生理學(xué)論文提交日期2015年4月17日論文答辯日期2015年5月31日答辯委員會(huì)主席張廷國教授第一部分初步探討腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因TMSG-1蛋白的入核機(jī)制摘要目的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因TMSG-1是新發(fā)現(xiàn)的一種重要的轉(zhuǎn)移抑制基因，通過檢測(cè)自然狀態(tài)及刺激狀態(tài)下Hela細(xì)胞中TMSG-1蛋白的表達(dá)及Hela細(xì)胞凋亡情況，初步探討TMSG-1蛋白的入核機(jī)制。方法免疫熒光檢測(cè)H
2、ela細(xì)胞內(nèi)自然存在的TMSG-1蛋白表達(dá)情況，對(duì)生長狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行不同劑量的H2O2刺激后，再利用免疫熒光檢測(cè)TMSG-1蛋白在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)情況有無差異；不同劑量H2O2刺激Hela細(xì)胞后，提取細(xì)胞mRNA和總蛋白，分別用反轉(zhuǎn)錄PCR和Westernblot測(cè)定TMSG-1基因及蛋白表達(dá)變化；流式細(xì)胞儀測(cè)定不同劑量H2O2刺激后Hela細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果免疫熒光結(jié)果表明，在自然存在及刺激狀態(tài)下，腫瘤細(xì)胞內(nèi)均有TMSG-1蛋白表達(dá)，H2O2刺激狀態(tài)下細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)量明顯高于細(xì)胞內(nèi)自然存在的蛋白量，且細(xì)胞核內(nèi)蛋白量增加；反轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)結(jié)果表明，H2O2
3、刺激后的Hela細(xì)胞內(nèi)TMSG-1基因表達(dá)量可能高于腫瘤細(xì)胞自然存在的蛋白量，H2O2刺激劑量為1.5mM時(shí)，蛋白表達(dá)量增加較明顯。Westernblot檢測(cè)結(jié)果表明，H2O2刺激劑量前后的Hela細(xì)胞內(nèi)TMSG-1蛋白表達(dá)量有顯著性差異（P<0.05），以H2O2刺激劑量1.5mM時(shí)最明顯。流式細(xì)胞儀測(cè)定結(jié)果顯示，H2O2刺激前后，細(xì)胞凋亡發(fā)生率有顯著改變（P<0.05），H2O2刺激劑量為1.5mM時(shí)，凋亡細(xì)胞百分率最高。結(jié)論H2O2刺激狀態(tài)下細(xì)胞內(nèi)TMSG-1蛋白表達(dá)量明顯高于細(xì)胞內(nèi)自然存在的蛋白量，在經(jīng)一定量的H2O2刺激后，細(xì)胞內(nèi)TMSG-1蛋
4、白表達(dá)量均有增加，細(xì)胞核內(nèi)蛋白量增加，且細(xì)胞凋亡發(fā)生率一定程度地增加，H2O2刺激能促進(jìn)TMSG-1蛋白入核并使TMSG-1表達(dá)增加，入核后TMSG-1蛋白發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。碩士研究生：李敬敬（病理學(xué)）指導(dǎo)教師：項(xiàng)鋒鋼教授關(guān)鍵詞：基因；蛋白；入核；應(yīng)激反應(yīng)；細(xì)胞凋亡Preliminarystudyonthenuclearimportmechanismsoftumormetastasissuppressorgene1AbstractObjectiveTumormetastasissuppressorgene1(TMSG-1/LASS2)isanimp
5、ortantmetastasissuppressorgenewhichisnewlydiscovered.Innormalandstimulatedconditions,wedetectedtheexpressionofTMSG-1andapoptosisofHelacells,andexploredthenuclearimportmechanismofTMSG-1protein.MethodsTheexpressionofTMSG-1wasdetectedbyimmunofluorescencebeforeandafterH2O2stimulation
6、.AfterstimulationofdifferentdosesofH2O2,reversetranscriptionPCRandWesternblotwasusedrespectivelytomeasuretheexpressionofTMSG-1mRNAandprotein.ThenwedetectedthedifferentincidenceofapoptosisbyFlowCytometryafterH2O2stimulation.ResultsImmunofluorescenceresultsshowedthattheTMSG-1expres
7、sioninHelacellscouldbedetectedbothinnaturalstateandstimulatedstate.Theexpressionwasmuchhigherinstimulatedstatethaninnaturalstate.ReversetranscriptionPCRresultsshowedthattheTMSG-1expressioninHelacellsinstimulatedstatewasmuchhigherthanthatinnaturalstate.WiththeincreasingdosesofH2O2
8、,theTMSG-1expressionincreasedgradually.T
