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《不同基因型紅麻及其近緣種親緣關(guān)系的RAPD分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、安徽農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文不同基因型紅麻及其近緣種親緣關(guān)系的RAPD分析姓名：徐偉申請學位級別：碩士專業(yè)：遺傳學指導教師：周立人;李愛青20050601摘要本文對紅麻7個常規(guī)栽培種和12個野生種及5個近緣種進行了RAPD分子標記的研究，在探討紅麻種子基因組DNA提純方法和優(yōu)化PCR擴增反應體系的基礎(chǔ)上，利用RAPD技術(shù)對紅麻品種基因組DNA多態(tài)性進行分析，依據(jù)分子標記研究結(jié)果探索了栽培種、野生種及近緣種的親緣關(guān)系及遺傳多樣性，并對紅麻的起源和傳播途徑作了初步探討。研究結(jié)果表明：1．為了提高效率，論文試驗探索出一種穩(wěn)定、高效的從紅麻種子中提取基因組DNA的新方法。該方法在普通的SDS法的
2、基礎(chǔ)上進行了重大的改進。在用液氮研磨樣品后，先加入預熱的提取液繼續(xù)研磨，然后保溫，這樣既抑制了DNA酶的水解活性，防止了其對DNA的降解，又使細胞中的基因組DNA得到充分釋放。加入氯仿：異戊醇(24：1)后強烈振蕩幾秒鐘，保證了蛋白質(zhì)的充分變性，又使DNA和其他雜質(zhì)充分分離。通過此方法獲得了高濃度和高質(zhì)量的基因組DNA，較好地用于PCR擴增，進行’RAPD分析。2．為了提高RAPD反應體系的穩(wěn)定性，以保證實驗的準確性和可重復性，對紅麻RAPD反應參數(shù)進行了設(shè)計，通過優(yōu)化實驗建立了合適穩(wěn)定的RAPD反應體系。在25Ⅱl反應體系中含有：1×buffer，2．Ommol／LMgCl：，20
3、0umol／LdNTPs，0．6llmol／L隨機引物，45ng的基因組DNA，1．OUTaq酶。反應擴增程序為：94℃預變性5min，使模板DNA充分變性，然后進入下列溫度循環(huán)：94。C變性30sec，38℃退火45sec，72℃延伸Imfn30sec，重復40個熱循環(huán)，結(jié)束循環(huán)后72℃終延伸7min。應用此條件進行多次重復，結(jié)果重現(xiàn)性良好。3．研究中篩選出了重復性好、有豐富多態(tài)性的21個引物，共產(chǎn)生140條帶，對12個紅麻野生種、5個近緣種和7個來源廣泛的各地栽培種進行RAPD分析，其中多態(tài)性帶119條，占85％，反映出不同紅麻品種間存在很大的遺傳差異，所篩選的21個引物在供試品
4、種中都有很高的多態(tài)性。采用UPGMA(UnweightPairGroupMethodwithArithmeticMean)聚類方法對GD進行遺傳分類，將供試品種聚成3大類：近緣種、野生種和栽培種。4．通過RAPD分子標記的研究，探索了紅麻品種間的親緣關(guān)系。研究結(jié)果表明，不同的紅麻野生種同栽培種之間的親緣關(guān)系有很大差別，其中有兩個野生種H004、H018也被劃分在栽培種這一類，表明了這兩個野生種同栽培種親緣關(guān)系相對其他野生種更緊密，推測H004、H018兩個品種屬于紅麻半野生品種。還發(fā)現(xiàn)紅麻栽培種的遺傳多樣性并不像形態(tài)學所體現(xiàn)的那樣豐富：而野生種中分子生物學上的遺傳多樣性遠比形態(tài)學和生
5、物學特性所表現(xiàn)的要豐富得多，因此在分子水平上對紅麻的研究更顯重要。5．在研究供試品種親緣關(guān)系的基礎(chǔ)上，進一步探討了紅麻品種的起源和傳播途徑。野生種被聚類在近緣種和栽培種之間，并且有兩個野生種與栽培種聚成了一類。野生分布的紅麻材料和它的非洲起源的近緣種之間的遺傳距離相對栽培種與近緣種的遺傳距離要近的多，而栽培類型的紅麻也通過野生紅麻種與近緣種保持一定的關(guān)系，這在一定程度上支持了紅麻起源于非洲的假設(shè)，也表明RAPD分析結(jié)果可用于對紅麻物種進化起源等方面的研究。關(guān)鍵詞：紅麻RAPD遺傳差異親緣關(guān)系起源進化AbstractInthisexperimentation，randomamplifi
6、edpolymorphicDNAOLAPD)techniquewasusedtoanalyzethegeneticrelationshipofsevencultivars，twelvewildspeciesandsixrelativeofHibiscuscannabinus三．．TheextractionmethodologyofgenomicDNAofHibiscuscannabinusL．wasexploredandtheinfluentialparameterswereoptimized．Onthebasisofthem，RAPDwasusedtoinvestigatetheg
7、eneticpolymorphismsamongthetwenty·fourbreeds．Andboththegeneticrelationshipsandthegeneticdifferencesofthemweretoberesearched，furthermore，theKenaf'scradlelandanditstransmitroutewerealSOdiscussed．Resultswereasfollows：1．Tosavetimeandr
