黃連屬藥用植物rapd鑒定與親緣關(guān)系分析

黃連屬藥用植物rapd鑒定與親緣關(guān)系分析

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1、EnglishAbstractsthemedicinalplantsofCoptisgenus。discussthegeneticrelationshipamongspecies,assessthegenuinenessofChuanhuanglianandprovidescientificevidenceforclassificatjonandfurtherstudyatmorphologic.chemicalandmolecularbiologicallevel.Keyword:medicinalPlantsofCoptis

2、genus;ChuanhuangIianRAPD;centralcompositedesign(CCD)dentification;geneticrelationship;HPLC5前言黃連為名貴中藥,我國入藥已有兩千多年的歷史,《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品。《蜀本草》中最早描述了黃連原植物的形態(tài):“苗似茶,叢生,一莖三葉,高尺許,凌冬不凋,花黃色。”《圖經(jīng)本草》日:“苗高一尺以來,葉似甘菊,四月開花,黃色,六月結(jié)實(shí)似芹,子色亦黃。二月八月采根用,生江左者根若念珠,其苗經(jīng)冬不凋。葉如小雉尾草,正月開花作細(xì)穗,淡白微黃色。六七月根緊,始

3、堪采。”唐·蘇恭日:“蜀道者粗大,味極濃苦,療渴為最。江東者結(jié)如連珠,療痢大善。”昧苦、性寒、入心、肝、胃、大腸經(jīng),功能清熱燥濕、瀉火解毒。具有抗菌、抗病毒、抗?jié)儭⒖寡?、?qiáng)心、降糖等藥理活性,被廣泛應(yīng)用于臨床治療泄瀉痢疾、中耳炎、急性扁桃體炎、百日咳、大葉性肺炎、流行性腦脊髓膜炎、膽囊炎等疾病。中藥材黃連為毛莨科黃連屬植物黃連CoptischinensfsFranch.及其同屬植物的干燥根莖?!禙I本藥局方》還收載了日本黃連Coptis』盤ponicaMakino.,同時(shí),我國各地還有多種栽培或野生黃連如三角葉黃連f幽』toi

4、deaC.Y.ChengetHsiao、云南黃連cteetofdesc.Y.Cheng、峨嵋野連Comefensis(Chert)C.Y.Cheng、西藏黃連CteetaWall.及線萼黃連elinearisepalaT.Z.WangetC.k.hsieh等作為藥用。RAPD(RandomAmplifiedPolymophicDNA,隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA)技術(shù),是美國的williams[11和Welsh[2I兩個(gè)研究小組于1990年同時(shí)提出的一種遺傳標(biāo)記技術(shù)。RAPD技術(shù)建立在PCR(PolymeraseChainReaction

5、)技術(shù)基礎(chǔ)上,它以任意序列的寡核苷酸單鏈(通常為10個(gè)堿基,AP-PCR則為20~30個(gè)堿基)為引物,對(duì)所研究的基因組DNA進(jìn)6行隨機(jī)擴(kuò)增,尋找多態(tài)性DNA片斷。willJams等【lJ已證明這種短的隨機(jī)引物可用于擴(kuò)增從低等到高等各種生物的基因組DNA,并且證明這種多態(tài)性是按孟德爾方式遺傳的,因而可以用此作為遺傳標(biāo)記。RAPD自從問世以來,在植物分類、中藥材鑒定、道地藥材研究、遺傳作圖等方面得到了廣泛的應(yīng)用。黃連屬藥用植物的分類與鑒定目前主要是依據(jù)形態(tài)學(xué)的特征,本文應(yīng)用RAPD技術(shù)構(gòu)建黃連屬藥用植物物種的基因組指紋圖譜,研究種間

6、與居群的DNA變異,從而揭示物種的親緣關(guān)系,為該屬物種鑒定及系統(tǒng)學(xué)研究提供DNA分子水平的證據(jù)。道地藥材的形成是由基因型和環(huán)境飾變等因素共同作用的結(jié)果,具有形態(tài)特征、遺傳特征、藥效特征等,但在形態(tài)和生藥性狀上差別往往不太明顯,而遺傳特征是道地藥材最重要的特征。近年來,我國學(xué)者對(duì)黃連的化學(xué)成分及藥理學(xué)有較多的研究報(bào)道,本文從分子水平比較了川黃連DNA分子的多態(tài)性,揭示了川黃連的遺傳特征,為JIl黃連的道地性、遺傳育種、GAP種植提供了基礎(chǔ)資料。第一部分原植物形態(tài)一、黃連CoptischinensisFranch.多年生草本,高20

7、~50cm。根狀莖細(xì)長柱狀,常有分支成簇生長,形如雞爪,全長3~9cm,直徑3~lOmm,表面粗糙,上部多殘留褐色鱗葉,節(jié)多而密,生有極多須根,兩節(jié)之問的節(jié)間伸長成細(xì)而光滑的圓柱狀,俗稱“過橋桿”或“跳桿”:外皮黃褐色,折斷面皮部紅棕色.木部金黃色,味極苦。葉基生,葉柄長5~16cm,葉片堅(jiān)紙質(zhì),卵狀三角形,長3~8cm,寬2.5~7cm,三全裂,中央全裂片有細(xì)柄,卵狀菱形,羽狀深裂,邊緣有銳鋸齒,側(cè)生裂片無柄,不等的二深裂。花葶l~2條,高12~25cm:項(xiàng)生聚傘花序,花3~8;總苞片通常3,披針形,羽狀深裂,小苞片圓形;萼片

8、5,黃綠色,窄卵形,長9~12.from;花瓣線狀,披針形,長5~7mm。中央有蜜槽;雄蕊多數(shù),長3~6mm,外輪雄蕊比花瓣略短或近等長;心皮8~12,離生,有短柄。瞢莢果6~12,長6~8mm,具細(xì)柄。(圖1.1)二、三角葉黃連口de/toideaC.Y.Oh

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