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《鋰匹魯卡品致癇大鼠杏仁核神經(jīng)元損傷機制的實驗研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、鋰-匹魯卡品致癇大鼠杏仁核神經(jīng)元損傷機制的實驗研究作者：梁決寅孫建英馮延秋楊忠【關(guān)鍵詞】鋰-匹【摘要】目的觀察鋰-匹魯卡品（LPC）致癇大鼠杏仁核神經(jīng)元損傷的形態(tài)學改變，并檢測細胞凋亡相關(guān)的DNA碎片標志物。方法用LPC誘發(fā)大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)(statusepilepticus，SE)3h，于癲癇中止后第24小時和第48小時處死動物。一組鼠用于制作腦切片，分別用光鏡和電鏡觀察；另一組從相同的腦區(qū)提取DNA，在含有溴乙錠的瓊脂糖凝膠上電泳。注射了生理鹽水的大鼠被用作陰性對照。結(jié)果在第24小時和第48小時兩個時點，SE大鼠杏仁核神經(jīng)元出現(xiàn)了形態(tài)學上的壞死和梯狀DNA電泳帶，對照組未見到壞死及凋
2、亡細胞。結(jié)論癲癇持續(xù)狀態(tài)后，形態(tài)學上表現(xiàn)為壞死的神經(jīng)元出現(xiàn)梯狀DNA電泳帶，提示在此模型中可能存在程序性細胞死亡的機制?！娟P(guān)鍵詞】癲癇持續(xù)狀態(tài)；凋亡；壞死；DNA梯狀電泳帶【Abstract】ObjectiveToobservethemorphologyofneuronaldeathinnucleusamygdalaeofratsafterstatusepilepticus(SE)inducedbylithium-pilocarpine(LPC),andcorrelatethiswithmarkersofDNAfragmentationthathasbeenassociatedwithc
3、ellularapoptosis.MethodsSEwasinducedfor3hourswithLPC.24or48hourslatertheratswerekilled.One9grouphadbrainsectionsstained，thenexaminedbylightandelectronmicroscopy.DNAwasextractedfromthesameareaandelectrophoresedonanagarosegelwithethidiumbromide.Thesameratsinjectedwithsalinewereusedasnegativecontrol
4、s.Results24and48hoursafterSE，wesawmorphologicallynecroticneuronsinnucleusamygdalae,aswellasDNAladder.Neitherapoptoticnornecroticneuronswereseeninratsinjectedwithsaline.ConclusionAfterSE,DNAladderwasseeninnucleusamygdalaewhereneuronsweremorphologicallynecrotic,whichsuggeststhatprogrammedcelldeathm
5、echanismsmaybeactivatedinthisSEmodel.【Keywords】statusepilepticus,apoptosis,necrosis,DNAladder癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)可導(dǎo)致神經(jīng)元死亡,尤其是邊緣系統(tǒng)。曾有人認為癇性發(fā)作誘導(dǎo)的神經(jīng)元死亡是凋亡，主要依據(jù)有TUNEL染色陽性和DNA梯狀電泳帶，然而，從目前所能得到的超微結(jié)構(gòu)資料來看，SE后神經(jīng)元的損傷以壞死為主［１，２］。因此，我們精確觀察SE誘導(dǎo)的大鼠杏仁核神經(jīng)元損傷超微形態(tài)學改變，并同時觀測SE后杏仁核區(qū)DNA梯狀電泳帶，這對探討SE后腦損傷的機制將提供最直接的證據(jù)。本研究還將進一步探討DNA梯狀電
6、泳帶在SE后神經(jīng)元損傷中的意義。1材料和方法91．1癲癇持續(xù)狀態(tài)模型的建立健康成年雄性Wistar鼠40只，3~4月齡，體重250~300g（由山東大學動物實驗中心提供）。籠養(yǎng)，自由進水、進食，室溫保持在18~25℃。將大鼠隨機分為兩組：鋰-匹魯卡品組(A組)和生理鹽水組(B組)，再分別進一步隨機分為A1、A2組及B1、B2組；其中A1、B1為24h處理組，A2、B2為48h處理組。參照文獻［３］將各組大鼠用苯巴比妥（45mg/kg）和氯胺酮（25mg/kg）麻醉（均采用腹腔注射），并同時在顱骨上于無菌操作下置入4根不銹鋼電極，置入電極后第3天分別記錄各組鼠的基礎(chǔ)腦電圖。參照Fujika
7、wa等實驗方法［4］，給A組鼠腹腔內(nèi)注射氯化鋰（3mEq/kg）,24h后再注射匹魯卡品（45mg/kg），誘發(fā)癇性發(fā)作。B組鼠給予等量生理鹽水腹腔注射。當A組鼠出現(xiàn)典型的癇性發(fā)作后開始記錄腦電圖，并使癇性發(fā)作持續(xù)3h，然后腹腔注射安定（10mg/kg）以終止發(fā)作。在癲癇終止后第24小時和第48小時兩個時點，腹腔注射苯巴比妥（200mg/kg），將兩組動物麻醉。1．2顯微鏡檢查的腦片制備將鼠麻醉后，用磷酸緩沖的2%多聚甲醛和0.1%
