農(nóng)桿菌介導(dǎo)木薯“新選048”遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步建立

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1、農(nóng)艷碩士學位豐論文碩士農(nóng)桿農(nóng)桿菌介導(dǎo)木薯“新選048”遺傳轉(zhuǎn)菌介化體系的初步建立導(dǎo)木薯新選048遺傳農(nóng)艷豐轉(zhuǎn)化體系的初步二○一四年六月建立2014分類號S533密級公開UDC碩士學位論文農(nóng)桿菌介導(dǎo)木薯“新選048”遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步建立農(nóng)艷豐學科專業(yè)作物栽培學與耕作學指導(dǎo)教師楊美純教授論文答辯日期2014年5月21日學位授予日期2014年6月28日答辯委員會主席楊麗濤教授廣西大學學位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)聲明本人聲明所呈交的論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨立進行研究所取得的研究成果。除已特別加以標注和致謝的地方外，論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或

2、撰寫的研究成果，也不包含本人或他人為獲得廣西大學或其它單位的學位而使用過的材料。與我一同工作的同事對本論文的研究工作所做的貢獻均已在論文中作了明確說明。本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的學位論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬廣西大學。本人授權(quán)廣西大學擁有學位論文的部分使用權(quán)，即：學校有權(quán)保存并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交學位論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存、匯編學位論文。本學位論文屬于：□保密，在年解密后適用授權(quán)?！醪槐Ｃ?。(請在以上相應(yīng)方框內(nèi)打“√”)

3、論文作者簽名：農(nóng)艷豐日期：2014.06.24指導(dǎo)教師簽名：楊美純?nèi)掌冢?014.06.24作者聯(lián)系電話：電子郵箱：nongyan889@126.com縮寫詞Englishabbreviationusedinthedissertation縮寫英文全稱中文名稱AbbreviationFullnameinEnglishFullnameinChinese6-BA6-Benzylaminopurine6-芐基腺嘌呤NAANaphthylaceticacid萘乙酸IBAIndolebutyricacid吲哚丁酸IAAIndol-3-aceticacid吲哚

4、-3-乙酸GA3Gibberellin赤霉素TDZThidiazuron噻苯隆KT6-furfurylaminopurine6-糠基氨基嘌呤2,4-DDichlorophenoxyaceticacid二氯苯氧乙酸METPaclobutrazol多效唑ZTZeatin玉米素KmKanamycin硫酸卡那霉素GMGentamycin慶大霉素CTXCefotaximesodium頭孢噻肟鈉SMStreptomycin鏈霉素CTRXCeftriaxoneSodium頭孢曲松鈉ACActivatedCarbon活性炭農(nóng)桿菌介導(dǎo)木薯“新選048”遺傳轉(zhuǎn)化體系

5、的初步建立摘要木薯是重要的旱地經(jīng)濟作物及能源植物，廣西是我國木薯的主產(chǎn)區(qū)，木薯“新選048”品種是廣西主栽品種之一，具有抗旱、高產(chǎn)的特點，具有很好的經(jīng)濟價值。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)，在優(yōu)良木薯品種中轉(zhuǎn)入抗逆性基因，獲得既高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)又具抗性的木薯新品種，是木薯育種的有效途徑。本研究通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)，在木薯“新選048”中轉(zhuǎn)入抗逆性基因，獲得如下研究結(jié)果：1.以腋芽為外植體的再生體系建立滅菌：春秋季節(jié)取外植體，以0.1%HgCl2處理12min滅菌效果最好，污染率控制在30%以內(nèi)，而成活率達到56.7%。初代誘導(dǎo)培養(yǎng)：添加KT的培養(yǎng)基外植體萌芽率比添加6-BA和

6、TDZ的要高，最適培養(yǎng)基為MS+KT0.5mg/L，外植體腋芽萌發(fā)率可達85.0%，增殖培養(yǎng)：細胞分裂素與NAA配比的效果比單使用細胞分裂素或者與赤霉素配比的都好，以MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培養(yǎng)基為最佳的增殖培養(yǎng)基，增殖率高，平均芽高度最高，可達5cm。生根培養(yǎng)：在合適的濃度下，單獨添加NAA、IBA、IAA的培養(yǎng)基誘導(dǎo)的生根率都可達到100%，平均根數(shù)以MS+NAA0.6mg/L培養(yǎng)基的最多，達6.9條。移栽：控制空氣濕度尤為重要，相對濕度太大，則容易引起組培苗植株莖段發(fā)霉腐爛，影響成活率。試驗中，移栽18d后存活率不

7、足10%，因此移栽技術(shù)還需進一步的研究。2、無菌葉片再生體系的建立選擇無菌葉片誘導(dǎo)愈傷組織，最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2,4-D5.0mg/L，誘導(dǎo)率可達90%以上，愈傷組織淡黃色透明松軟，在進一步培養(yǎng)中容易轉(zhuǎn)化為胚性愈傷組織。愈傷組織的增殖培養(yǎng)基則以MS+2,4-D3.0mg/L為適宜，增殖率為90%。愈傷組織分化采用6-BA和NAA配合以及硫酸銅兩種處理來誘導(dǎo)不定芽，結(jié)果6-BA和NAA配合處理并沒有無菌芽的分化，而MS+CuSO4200mg/L處理有不定芽分化，但分化率不高。3、遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步建立以無菌葉片和愈傷組織作為材料進行抗生素選擇壓

8、的試驗，以確定培養(yǎng)材料細胞全部死亡的最低抗生素濃度。試驗結(jié)果為葉片抗生素選擇壓的培養(yǎng)基為MS+3.0mg/L2,4-D+2.3g/LKm