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《細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響-張?jiān)隆酚蓵?huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、第32卷第5期長(zhǎng)春師范學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）2013年10月Vol.32No.5JournalofChangchunNormalUniversity(NaturalScience)Oct.2013吳茱萸堿對(duì)SGC－7901細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響張?jiān)?，葛雅?吉林化工學(xué)院化工與生物技術(shù)學(xué)院，吉林省吉林市132022)［摘要］本文研究吳茱萸堿對(duì)胃癌細(xì)胞SGC－7901凋亡的影響，用不同濃度的吳茱萸堿處理SGC－7901細(xì)胞，采用MTT法評(píng)價(jià)吳茱萸堿對(duì)SGC－7901細(xì)胞增殖的影響;用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)吳茱萸堿對(duì)SGC－7901細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響;Western－blo
2、t檢測(cè)其對(duì)caspase－3的表達(dá)影響。結(jié)果表明吳茱萸堿激活了caspase－3，引起明顯的SGC－7901細(xì)胞G2/M期阻滯和凋亡。［關(guān)鍵詞］吳茱萸堿;細(xì)胞周期;細(xì)胞凋亡;胃癌［中圖分類號(hào)］Q732［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A［文章編號(hào)］1008－178X(2013)05－0071－04［1］吳茱萸是蕓香科植物吳茱萸、石虎及梳毛吳茱萸成熟的果實(shí)。吳茱萸堿(Evodiamine，Evo)是從吳茱萸中提取出的主要活性生物堿之一，其分子式為C19H17N3O。近年來的研究表明吳茱萸堿對(duì)多種腫瘤細(xì)胞，［2］［3］［4］［5］［6］［7］［8］如腎癌細(xì)胞、前列腺癌、乳腺癌、黑色素瘤，宮頸癌
3、，胃癌，結(jié)腸癌等具有抑制作用。［9］胃癌是世界上最常見的癌癥之一，僅次于肺癌，位居第二，每年全球大約有800，000人死于此病。其中大約有三分之二的新生病例和死亡病例是發(fā)生在欠發(fā)達(dá)國(guó)家和地區(qū)。日本、中國(guó)、韓國(guó)、中南美洲、東歐以及［10－11］中東部分地區(qū)是胃癌的高發(fā)區(qū);而北美、澳大利亞、新西蘭、北歐和印度的發(fā)病率較低。胃癌患者的五年的生存率不足20%。對(duì)于那些早期診斷的患者，應(yīng)用內(nèi)窺鏡粘膜切除術(shù)(Endoscopicmucosalresection，EMＲ)可以對(duì)其進(jìn)行治療;目前這種外科手術(shù)的方式也只能治愈不到40%的病例，大多數(shù)胃癌都發(fā)生了轉(zhuǎn)移，最后只能依靠輔助化療的
4、方式對(duì)其進(jìn)行治療。對(duì)晚期和復(fù)發(fā)的患者，化療成了主要治療手段。因此，高效、低毒并具有新作用機(jī)制的抗腫瘤藥物的研究迫在眉睫。本研究探討了吳茱萸堿誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞SGC－7901的凋亡作用及其機(jī)制。1材料與方法1．1主要試劑吳茱萸堿(Evodiamine)購(gòu)自SIGMA公司。Anti－Caspase3、β－actin抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG抗體均購(gòu)自SantaCruz公司;新生牛血清、DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自Gibco公司;PVDF膜(0．22μm)，Millipore公司;預(yù)染蛋白Marker，購(gòu)自Fermentas公司。Anne
5、xinV－FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒，BD公司。1．2細(xì)胞培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞系SGC－7901細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。SGC－7901細(xì)胞用含10%的新生牛血清的DMEM培養(yǎng)基，5%CO2、37℃、飽和濕度的恒溫孵育箱培養(yǎng)。1．3MTT實(shí)驗(yàn)3將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞SGC－7901以5×10個(gè)/孔濃度接種于96孔板中培養(yǎng)過夜。用吳茱萸堿(0.000001～100μM)處理SGC－7901細(xì)胞48h。每個(gè)濃度3個(gè)復(fù)孔，并設(shè)空白對(duì)照和陰性對(duì)照孔。細(xì)胞加藥處理后的時(shí)間點(diǎn)，分別加入5mg/ml的MTT20μL，37℃繼續(xù)孵育4h。輕輕吸去孔內(nèi)的培養(yǎng)基，每孔加入［收稿日期］2013－0
6、6－05［作者簡(jiǎn)介］張?jiān)?1978－)，男，遼寧建昌人，吉林化工學(xué)院化工與生物技術(shù)學(xué)院講師，博士，從事天然藥物與腫瘤研究。［通訊作者］葛雅琨(1977－)，女，遼寧建昌人，吉林化工學(xué)院化工與生物技術(shù)學(xué)院講師，博士，從事小分子化合物與腫瘤研究?！?1·150μl的二甲基亞砜(DMSO)。在酶標(biāo)儀中震板10min，測(cè)定490nm的光吸收值。計(jì)算存活率和抑制率，公式如下:存活率=實(shí)驗(yàn)組OD平均值/對(duì)照組OD平均值×100%．抑制率=(對(duì)照組OD平均值－實(shí)驗(yàn)組OD平均值)/對(duì)照組OD平均值×100%．1．4細(xì)胞凋亡與細(xì)胞周期將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)胞以每孔4×105個(gè)接種于六孔板中，貼
7、壁培養(yǎng)過夜后，按照設(shè)計(jì)的不同藥物濃度(0.01～100μM)處理細(xì)胞。在藥物的作用時(shí)間點(diǎn)，把細(xì)胞培養(yǎng)液吸出至一個(gè)合適的離心管內(nèi)，PBS洗滌貼壁細(xì)胞一次，加入適量的胰酶消化細(xì)胞，37℃孵育2min，用含血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細(xì)胞，合并在同一離心管中，但避免胰酶的過度消化。1500rpm，離心3min，棄上清，收集細(xì)胞，用PBS輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。1500rpm，離心3min，棄上清，用1×LoadingBuffer將細(xì)胞配成濃度為106的細(xì)胞懸液。取100μl細(xì)胞懸液分別依次加入5μlAnnexinⅤ－FITC和5μlPI，輕輕混勻
