環(huán)氧合酶2在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及臨床意義

《環(huán)氧合酶2在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及臨床意義》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文環(huán)氧合酶-2在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及臨床意義姓名：孫穎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：王敏20030401中文摘要刖置I子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道常見的三大惡性腫瘤之一，約占女性癌癥總數(shù)的7％，占女性生殖道惡性腫瘤的20％一30％。近年來其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈持續(xù)上升趨勢(shì)，是威脅婦女生命的一個(gè)主要疾病。因此，子宮內(nèi)膜癌的病因?qū)W研究及尋找早期診斷和有效治療子宮內(nèi)膜癌的方法一直是學(xué)者們研究的熱點(diǎn)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，癌基因、抑癌基因及相關(guān)物質(zhì)異常被認(rèn)為是正常組織癌變并導(dǎo)致生物學(xué)

2、行為一系列改變的基本原因。流行病學(xué)的研究表明，服用非甾體類抗炎藥可使結(jié)腸癌的發(fā)生率降低40％～50％。其原因很可能與該藥對(duì)環(huán)氧合酶(COX)的抑制作用有關(guān)。COX是一種膜結(jié)合蛋白，是前列腺素生物合成的限速酶。目前發(fā)現(xiàn)人類基因至少含有COX的兩種基因編碼，即COX—l和COX一2。COX一2是早表達(dá)基因，它被細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、絲裂原等迅速誘導(dǎo)產(chǎn)生，在炎癥和腫瘤中起重要作用。越來越多的研究表明，在結(jié)直腸癌、食管癌、肺癌、胃癌、宮頸癌、膀胱癌等多種上皮性腫瘤中，都有COX一2表達(dá)的異常增高，但有關(guān)COX一2在子宮內(nèi)膜癌

3、組織中的表達(dá)及其與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征關(guān)系的研究尚未見報(bào)道。7為確定COX一2與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，本研究采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(1it—PCR)法對(duì)32例子宮內(nèi)膜癌，10例不典型增生子宮內(nèi)膜和10例正常子宮內(nèi)膜組織中COX一2mRNA水平進(jìn)行檢測(cè)。．／資料與方法1．資料來源取2000年3月一2002年3月于中國醫(yī)科大學(xué)第一、第二臨床學(xué)院婦科刮宮或手術(shù)切除的新鮮組織標(biāo)本52例，分為3組：(1)子宮內(nèi)膜癌組32例；(2)不典型增生子宮內(nèi)膜組10例；(3)正常子宮內(nèi)膜組10例。所有病例均為初治病例，平均

4、年齡53．7歲。部分標(biāo)本經(jīng)福爾馬林固定，進(jìn)行常規(guī)HE染色，請(qǐng)二位病理專家閱片，按國際婦產(chǎn)聯(lián)盟(FIGO)1988年修訂的標(biāo)準(zhǔn)確定病理學(xué)診斷、組織學(xué)類型和組織學(xué)分級(jí)。其余標(biāo)本置液氮中冷凍，然后送于一70℃冰箱中保存。子宮內(nèi)膜癌組均有完整的臨床病理資料，其中內(nèi)膜樣腺癌22例，腺角化癌7例，透明細(xì)胞癌3例；手術(shù)一病理分期I期18例，Ⅱ期9例，Ⅲ期5例；組織學(xué)分級(jí)G，級(jí)14例，G：級(jí)10例，G，級(jí)8例；伴深肌層浸潤(rùn)12例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5例；腹腔液細(xì)胞學(xué)檢查陽性4例。2．主要試劑COX一2及內(nèi)參照引物均由北京奧科生物有限責(zé)任

5、公司合成；提取總RNA的TRIzol試劑由美國Promega公司提供；逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增所需的酶及其它試劑由日本TaKaRa公司提供；電泳用瓊脂糖由沈陽聯(lián)星生物公司提供。3．方法(1)總RNA提?。翰捎肨RIzol一步抽提法。RNA純度采用紫外透射儀測(cè)定OD值，O!)260／280值為1．6—2．0。(2)逆轉(zhuǎn)錄合成eDNA：在10“反應(yīng)體系中分別加入樣本RNA1山以90℃孵育3min，42℃30min合成eDNA。(3)PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物分析：在PCR反應(yīng)體系中將eDNA產(chǎn)物及引物在95。C90s預(yù)變性，94℃90

6、s變性，55℃45s退火，72℃90s復(fù)性，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)后，72℃10rain延伸。另一反應(yīng)體系中同時(shí)擴(kuò)增B—actin作為內(nèi)對(duì)照。將PER擴(kuò)增產(chǎn)物用2％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，溴乙錠染色分析，紫外燈下拍照，電泳凝膠成像及自動(dòng)分析系統(tǒng)攝像、并檢測(cè)各擴(kuò)增帶的產(chǎn)物含量。中X174一ninelIDNAMarker為分子量標(biāo)準(zhǔn)。每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)陽性及空白對(duì)照。·2·4．結(jié)果判斷：EB顯色后，與Marker相比較有305bp條帶及內(nèi)對(duì)照690bp條帶顯示者判斷為陽性，僅有內(nèi)對(duì)照690bp條帶顯示者判斷為陰性。用內(nèi)對(duì)照吸光度值標(biāo)化C

7、OX一2吸光度值，得到COX一2的相對(duì)含量，具體計(jì)算公式如下：COX一2相對(duì)含量=(COX一2密度／13一actin密度)X100。5．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。表達(dá)率采用Fisher’s精確概率法和X2檢驗(yàn)；相對(duì)含量采用方差分析和t檢驗(yàn)。結(jié)果1．COX一2mRNA在子宮內(nèi)膜癌、不典型增生子宮內(nèi)膜及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)：三種組織中都有COX～2mRNA的表達(dá)，在子宮內(nèi)膜癌和不典型增生子宮內(nèi)膜組織中，COX一2mRNA表達(dá)率高于正常子宮內(nèi)膜組織，經(jīng)Fisher’s精確概率法檢驗(yàn)，有顯著性差異(P

8、<0．05)，而兩者問表達(dá)率比較，差異元顯著性(P>0．05)；COX一2mRNA在三種組織中的相對(duì)含量經(jīng)方差分析，差異非常顯著(P<0．01)，兩兩比較經(jīng)Q檢驗(yàn)，亦有顯著性差異(P<0．叭)。2．COX一2mRNA異常表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系：COX一2mRNA的表達(dá)率在不同的病理類型、手術(shù)一病理分期、組織學(xué)分級(jí)、肌層浸潤(rùn)、腹腔液細(xì)胞學(xué)檢查及淋巴