《疫血清學技術》PPT課件

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1、第十四章免疫血清學技術岳華第一節(jié)概述凝聚性反應(包括凝集試驗和沉淀試驗)標記抗體技術(包括熒光抗體、酶標抗體、放射性標記抗體、發(fā)光標記抗體技術等)。有補體參與的反應(補體結合試驗、免疫粘附血凝試驗等)。中和反應(病毒中和試驗、毒素中和試驗)等。免疫復合物散射反應(激光散射免疫技術)電免疫反應(免疫傳感器技術)免疫轉印(WesternBlotting)等新技術。第二節(jié)凝聚性試驗抗原與相應抗體結合形成復合物，在有電解質存在下，復合物相互凝聚形成肉眼可見的凝聚小塊或沉淀物，根據(jù)是否產生凝聚現(xiàn)象來判定相應抗體或抗原，稱為凝聚性試驗。是最簡單的一類血清學試驗。根據(jù)參與反應的抗原性質不同，分為由顆粒性

2、抗原參與的凝集試驗和由可溶性抗原參與的沉淀試驗二大類。一、凝集試驗細菌、紅細胞等顆粒性抗原，或吸附在膠乳、白陶土、離子交換樹脂和紅細胞的抗原，與相立抗體結合，在有適當電解質存在下，經過一定時間，形成肉眼可見的凝集團塊，稱為凝集試驗（agglutinationtest)。參與凝集試驗的抗體主要為IgG、lgM,又稱為凝集素。凝集試驗可用于檢測抗原或抗體，最突出的優(yōu)點是操作簡便，深受基層工作歡迎。凝集試驗可根據(jù)抗原的性質、反應的方式分為直接凝集試驗(簡稱凝集試驗)和間接凝集試驗。顆粒性抗原與凝集素直接結合并出現(xiàn)凝集現(xiàn)象的試驗稱作直接凝集試驗（directagglutinationtest)。（

3、一）直接凝集試驗操作方法玻片法試管法1、玻片法為一種定性試驗。將含有已知抗體的診斷血清(適當稀釋)與待檢菌懸液各一滴在玻片上混合，數(shù)分鐘后，如出現(xiàn)顆粒狀或絮狀凝集，即為陽性反應。此法簡便快速，適用于新分得細菌的鑒定或分型。如沙門氏菌的鑒定、血型的鑒定等多采用此法。也可用已知的診斷抗原懸液，檢測待檢血清中是否存在相應抗體，如布氏桿菌的玻板凝集反應和雞白痢全血平板凝集試驗。2、試管法為一種定量試驗，用已知抗原以檢測待測血清中是否存在相應抗體和測定該抗體的含量，以協(xié)助臨床診斷或供流行病學調查。將待檢血清用生理鹽水作倍比稀釋，然后加入等量抗原，置37℃水浴數(shù)小時觀察。視不同凝集程度記錄為十十十十(

4、100%凝集)、十十十(75%凝集)、十十(50%凝集)、十（25%凝集)和-(不凝集)。以其“十十”以上的血清最大稀釋度為該血清的凝集價(或稱滴度)。（二）間接凝集試驗將可溶性抗原(或抗體)先吸附于一種與免疫無關的、一定大小的不溶性顆粒(統(tǒng)稱為載體顆粒)的表面，然后與相應抗體(或抗原)作用，在有電解質存在的適宜條件下，所出現(xiàn)的特異性凝集反應稱為間接凝集反應。間接凝集反應由于載體顆粒增大了可溶性抗原的反應面積，因此當顆粒上的抗原與微量抗體結合后，就足以出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應。間接凝集反應的優(yōu)點是敏感性高，它一般要比直接凝集反應敏感2～8倍。但特異性較差。常用的載體有紅細胞(“O”型人紅細胞

5、，羊紅細胞)、聚苯乙烯膠乳顆粒，其次為白陶土、離子交換樹脂、火棉膠等?？乖酁榭扇苄缘鞍踪|如細菌、立克次體及病毒的可溶性抗原、或原蟲、吸蟲、絲蟲的浸出液、或動物的可溶性物質、或激素及各種組織器官浸出液、域植物性蛋白質如花粉浸出液等;某些細菌的可溶性多糖也可吸附于載體上。當載體吸附了可溶性抗原后即稱為致敏顆粒。亦稱被動血凝試驗(PHA)，是將可溶性抗原致敏于紅細胞表面，用以檢測相應抗體，在與相應抗體反應時出現(xiàn)肉眼可見凝集。1、間接血凝試驗(IHAT)2、反向間接血凝試驗：如將抗體致敏于紅細胞表面，用以檢測檢樣中相應抗原，致敏紅細胞在與相應抗原反應時發(fā)生凝集，稱為反向間接血凝試驗(revers

6、epassiveheamagglutinationassay，RPHA)。3、協(xié)同凝集試驗(co-agglutinationtest，COAG)葡萄球菌A蛋白(StaphylococalProteinA,SPA)是金黃色葡萄球菌的特異性表面抗原，能與多種哺乳動物lgG分子的Fc片結合。SPA與lgG結合后，后者的Fab片暴露于外，并保持其抗體活性，當此SPA-特異性抗體與相應的抗原結合時，就可產生凝集反應。本法廣泛應用于多種細菌和某些病毒的快速診斷。（三）、間接凝集抑制試驗二、沉淀試驗可溶性抗原(如細菌的外毒素、內毒素、菌體裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、組織浸出液等)與相應抗體結合，在適

7、量電解質存在下，形成肉眼可見的白色沉淀，稱為沉淀試驗(precipitationtest)。參與沉淀試驗的抗原稱沉淀原，抗體稱為沉淀素。（一）環(huán)狀沉淀試驗是最簡單、最古老的一種沉淀試驗，目前仍有應用。在小口徑試管內先加入已知抗血清，然后小心沿管壁加入待檢抗原于血清表面，使之成為分界清晰的兩層。數(shù)分鐘后，兩層液面交界處出現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀，即為陽性反應。本法主要用于抗原的定性試驗，如診斷炭疽的Ascoli試驗、鏈球菌血清型鑒定