《疫血清學(xué)技術(shù)》PPT課件

《《疫血清學(xué)技術(shù)》PPT課件》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、免疫血清學(xué)技術(shù)用于檢測抗原或抗體的體外免疫反應(yīng)技術(shù)或稱免疫檢測技術(shù)，這一類技術(shù)因一般都需用血清進(jìn)行試驗，通常稱為免疫血清學(xué)反應(yīng)或免疫血清學(xué)技術(shù)第四講一、凝聚性試驗抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成復(fù)合物，在有電解質(zhì)存在下，相互凝聚形成肉眼可見的凝聚小塊或沉淀物，根據(jù)是否產(chǎn)生凝聚現(xiàn)象來判定相應(yīng)抗體或抗原，稱為凝聚性試驗根據(jù)參與反應(yīng)的抗原性質(zhì)不同，分為由顆粒性抗原參與的凝集試驗和由可溶性抗原參與的沉淀試驗二大類（一）凝集試驗細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原，與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有適當(dāng)電解質(zhì)存在下，經(jīng)過一定時間，形成肉眼可見的凝

2、集團(tuán)塊，稱為凝集試驗(agglutinationtest)。參與凝集試驗的抗體主要為IgG、IgM。凝集試驗可用于檢測抗原或抗體。凝集試驗可根據(jù)抗原的性質(zhì)、反應(yīng)的方式分為直接凝集試驗（簡稱凝集試驗）和間接凝集試驗。直接凝集試驗顆粒性抗原與凝集素直接結(jié)合并出現(xiàn)凝集現(xiàn)象的試驗稱作直接凝集試驗(directagglutinationtest)玻片法：定性試驗，適用于新分離細(xì)菌的鑒定或分型試管法：定量試驗，檢測待測血清中是否存在相應(yīng)抗體和測定抗體含量間接凝集試驗將可溶性抗原(或抗體)先吸附于一種與免疫無關(guān)的，

3、一定大小的不溶性顆粒(統(tǒng)稱為載體顆粒)的表面，然后與相應(yīng)抗體(或抗原)作用，在有電解質(zhì)存在的適宜條件下，所出現(xiàn)的特異性凝集反應(yīng)稱為間接凝集反應(yīng)。敏感性高，但特異性較差可溶性抗原細(xì)菌、立克次氏體及病毒的可溶性抗原原蟲、吸蟲、絲蟲的浸出液動物的可溶性物質(zhì)激素及各種組織器官浸出液植物性蛋白質(zhì)如花粉浸出液等某些細(xì)菌的可溶性多糖常用的載體顆粒有紅細(xì)胞(“O”型人紅細(xì)胞，羊紅細(xì)胞)、聚苯乙烯膠乳顆粒，白陶土、離子交換樹脂、火棉膠致敏顆粒：載體吸附了可溶性抗原間接血凝試驗將抗原致敏于紅細(xì)胞表面，用以檢測相應(yīng)抗體，在

4、與相應(yīng)抗體反應(yīng)時出現(xiàn)肉眼可見凝集，稱為間接血凝試驗(passiveheamagglutinationassay,PHA)將抗體致敏于紅細(xì)胞表面，用以檢測檢樣本中相應(yīng)抗原，致敏紅細(xì)胞在與相應(yīng)抗原反應(yīng)時發(fā)生凝集，稱為反向間接血凝試驗(reversepassiveheamagglutinationassay,RPHA)。乳膠凝集試驗聚苯乙烯乳膠是利用化工原料聚苯乙稀經(jīng)過乳液聚合得到的高分子乳膠液，乳膠微球直徑約0.8?m。對蛋白質(zhì)、核酸等高分子物質(zhì)具有良好的吸附性能。利用聚苯乙烯乳膠的微球作載體，以吸附某些

5、抗原(或抗體)，即能用以檢測相應(yīng)的抗體(或抗原)，稱為乳膠凝集反應(yīng)。(latexagglutinationtest)協(xié)同凝集試驗葡萄球菌A蛋白(staphylococalproteinA，簡稱SPA)是大多數(shù)金黃色葡萄球菌的特異性表面抗原，能與多種哺乳動物IgG分子的Fc片結(jié)合。SPA與IgG結(jié)合后，其Fab片暴露于外，并保持其抗體活性。當(dāng)此被覆著特異性抗體的葡萄球菌與相應(yīng)的抗原結(jié)合時，就可互相連結(jié)引起協(xié)同凝集反應(yīng)，簡稱COAG。（二）沉淀試驗可溶性抗原(如細(xì)菌的外毒素、內(nèi)毒素、菌體裂解液，病毒的可溶

6、性抗原、血清、組織浸出液等)與相應(yīng)抗體結(jié)合，在適量電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的白色沉淀，稱為沉淀試驗(precipitationtest)?？乖梢允嵌嗵?、蛋白質(zhì)、類脂等，抗原分子較小，單位體積內(nèi)所含的量多，與抗體結(jié)合的總面積大，故在作定量試驗時，為了不使過剩，通常稀釋抗原，并以抗原稀釋度作為沉淀試驗效價。參加沉淀試驗的抗原稱沉淀原，抗體稱為沉淀素。環(huán)狀沉淀試驗在小口徑試管內(nèi)先加入已知抗血清，然后小心沿管壁加入待檢抗原于血清表面，使之成為分界清晰的兩層數(shù)分鐘后，兩層液面交界處出現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀，即為陽性

7、反應(yīng)。本法主要用于抗原的定性試驗，如炭疽病的診斷(Ascoli試驗)。試驗時出現(xiàn)白色沉淀帶的最高抗原稀釋倍數(shù)，即為血清的沉淀價。瓊脂免疫擴(kuò)散試驗瓊脂的作用抗原抗體在瓊脂凝膠中擴(kuò)散，當(dāng)二者在比例適當(dāng)處相遇，即發(fā)生沉淀反應(yīng)，形成肉眼可見的沉淀帶，此種反應(yīng)稱為瓊脂免疫擴(kuò)散，又簡稱瓊脂擴(kuò)散和免疫擴(kuò)散。單向單擴(kuò)散單向雙擴(kuò)散雙向單擴(kuò)散雙向雙擴(kuò)散免疫電泳技術(shù)免疫電泳對流免疫電泳火箭免疫電泳二、標(biāo)記抗體技術(shù)抗體、抗原分子小，在含量低時形成的抗原抗體復(fù)合物是不可見的。將特殊物質(zhì)標(biāo)記在抗體分子上，通過檢測標(biāo)記分子來顯示抗

8、原抗體復(fù)合物的存在，即根據(jù)抗原抗體結(jié)合的特異性和標(biāo)記分子的敏感性建立的技術(shù)，稱為標(biāo)記抗體技術(shù)(labelledantibodytechnique)。高敏感性的標(biāo)記分子熒光素酶分子放射性同位素?zé)晒饪贵w技術(shù)酶標(biāo)抗體技術(shù)同位素標(biāo)記技術(shù)（一）熒光抗體標(biāo)記技術(shù)fluorescent-labelledantibodytechnique是指用熒光素對抗體或抗原進(jìn)行標(biāo)記，然后用熒光顯微鏡觀察所標(biāo)記的熒光以分析示蹤相應(yīng)的抗原或抗體的方法。熒光色素是能夠產(chǎn)生明顯熒光，并能作