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《細(xì)菌蛋白HrpA單克隆抗體的制備》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文細(xì)菌蛋白HrpA單克隆抗體的制備姓名：王天文申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：王宗華;魯國(guó)東2003.5.1福建農(nóng)林大學(xué)碩士論文細(xì)菌HrpA蛋白單克隆抗體的制備摘要植物病原細(xì)菌中，調(diào)控植物過敏性反應(yīng)和致病性反應(yīng)的基因稱為過敏性反應(yīng)和致病性基因(hypersensitivereactionandpathogenicity，hrp基因)。幾乎在所有的動(dòng)植物革蘭氏陰性病原細(xì)菌都含有此類基因。這些基因多組織成基因簇的形式且相當(dāng)保守。在誘導(dǎo)培養(yǎng)基或植物體內(nèi)，基因簇中的一個(gè)結(jié)構(gòu)基因hrpA編碼的蛋白質(zhì)HrpA，是細(xì)菌表面一
2、種絲狀且類似鞭毛的表面附屬物(Hrp菌毛)的主要組分。Hrp菌毛在植物與病菌的相互作用中扮演十分重要的角色。病原細(xì)菌能否使親和性的植物發(fā)病與其Hrp菌毛的有無有直接的和決定性的聯(lián)系。為進(jìn)一步研究Hrp菌毛的功能和利用抗體工程方法控制這類植物病害，我們采用雜交瘤技術(shù)，對(duì)已經(jīng)轉(zhuǎn)化了丁香假單胞菌番茄變種hrpA基因的大腸桿菌表達(dá)的工程蛋白HrpA(Ps)為抗原，經(jīng)過免疫、融合、篩選、克隆等步驟，獲得了可以產(chǎn)生特異性抗體的2株單克隆雜交瘤細(xì)胞系。ELISA和Westernblotting分析表明，用工程菌株誘導(dǎo)表達(dá)的工程蛋白HrpA(Ps)作抗原免疫小鼠獲得的雜
3、交瘤細(xì)胞其產(chǎn)生的抗體，可以識(shí)別丁香假單胞菌番茄變種工程蛋白HrpA(Ps)，但不識(shí)別梨火疫病歐文氏菌的工程蛋白HrpA(Ea)，得到的單抗還可以識(shí)別丁香假單胞菌番茄變種野生型菌株誘導(dǎo)產(chǎn)生的菌毛中的天然HrpA蛋白，說明所得到的單克隆抗體特異性和親和性都很好。雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體可以作為相關(guān)實(shí)驗(yàn)的材料，雜交瘤細(xì)胞也可作為從事植物抗體研究時(shí)抗體基因的來源。研究結(jié)果為認(rèn)識(shí)丁香假單胞菌等第3分泌系統(tǒng)及其致病機(jī)制奠定了良好基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：丁香假單胞菌Fh-pA蛋白hrp基因單克隆抗體福建農(nóng)林大學(xué)碩士論文PreparationofMonoclonalAntibodyA
4、gainsttheBacterialProteinHrpA2AbstractInplantbacterialpathogens，thereisagenefamilythatregulatesthebacteriatriggeringhypersensitivereactionandpathogenicity(脅p)inplant．Thesegenesareconservedandclusteredasapathogenicityislandinmostcases．Whenbacteriagrowinhrpinducingminimalmediumorin
5、planta，oneofthestructuralgeneinthegenecluster,hrpagene，encodesaproteinnamedasHrpA．HrpAismajorcomponentofthefilamentoussurfaceappendage，Hrppilus，whichplaysaveryimportantroleintheinteractionbetweenbacteriaandtheirhostplant．Ithasbeendemonstratedthereisadirectanddecisiverelationshipb
6、etweenexistenceofthepilusanditscausinghrpinhost，givingUShintsofthepossibilitytoimproveplantresistancebyblockingtheHrppilusassemblythroughexpressionofengineeredantibodiesinplanta．TostudyHrppilusfunctionandapplytheengineeringantibodyapproachincontrollingthediseasecausedbythesebacte
7、ria,weemployedthesophisticatedandtime-consuminghybridomatechnology．Wegottwohybridomacelllinesbyimmunizingmice(BALB／c1、ⅣitllproteinpurifiedfromengineeredE．colibacteriathatconferthehrpAgeneofPseudomonassyringaepv．tomatoDC3000，fusingspleencellswithmyelomacells(SP2／O)，screeningpositi
8、vecandidatewithindirectenzyme—linkedimmu
