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1、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文番茄灰霉生防菌的篩選、鑒定和生防機(jī)制初探姓名：魏東盛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：劉大群2002.6.1fu』JE農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要本研究采用稀釋法從土壤、葉子、根和花4種不同的樣本中分離細(xì)菌，共分離得到315株．采用平板法和葉盤法相結(jié)合的方法對(duì)其進(jìn)行初步篩選和再次篩選，經(jīng)初步平板篩選后，有95株細(xì)菌對(duì)番茄灰霉有抑制作用．經(jīng)過第一次葉盤法篩選后，有44株在葉盤上有抑制作用，其中有12株能較強(qiáng)抑制灰霉菌生長(zhǎng)．在第二次葉盤法篩選中得到2株既能在無營養(yǎng)平板上擴(kuò)展又能在葉盤上抑制灰霉菌生長(zhǎng)的菌株．第三
2、次葉盤試驗(yàn)表明，這兩個(gè)菌株能在葉盤上完全、持久的抑制灰霉菌的生長(zhǎng)．在葉盤上抑制作用較為明顯的6個(gè)菌株中有3株來自于植物的地上部分，抑制作用最強(qiáng)的菌株B21和B14來自于重病田的健康番茄植株．廠／對(duì)B21的鑒定結(jié)果表明，無論是它的形態(tài)特征還是生理生化特征均與枯草芽(孢桿菌的特征相符合，因此初步確定其為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)．用平板對(duì)峙生長(zhǎng)法對(duì)B21的菌體抑菌譜進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，B21是一株有較廣抑菌譜的生防菌株，除能抑制灰霉菌之外，還能抑制棉花黃萎菌等多種病原菌．用搖瓶發(fā)酵的方法對(duì)B21的發(fā)酵條件進(jìn)行了初步篩選
3、．結(jié)果表明，在所選的培養(yǎng)基為Ps，發(fā)酵溫度為30"C、轉(zhuǎn)速為200rpm、初始pH值為6、發(fā)酵時(shí)間為36h時(shí)產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)的抑菌活性最強(qiáng)．溫室防治試驗(yàn)結(jié)果表明，在提前24h接種灰霉菌的孢子懸浮液的情況下，菌株B2I無菌發(fā)酵液能顯著抑制灰霉病的發(fā)生，防治效果比常用的農(nóng)藥萬霉靈500倍稀釋液效果還要好，因此，它有可能成為一種有效的生防制劑．用平板法、葉盤法結(jié)合組織透明法對(duì)B21的生防機(jī)制進(jìn)行了初步研究．用洋蔥內(nèi)表皮所做的組織透明實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在洋蔥內(nèi)表皮上灰霉菌的孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)均受到抑制，并且灰霉菌的分生孢子形狀發(fā)生畸變．葉盤法實(shí)驗(yàn)結(jié)果
4、表明，無菌發(fā)酵液在葉盤上同樣也能抑制灰霉菌孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)．因此可以確定，枯草芽孢桿菌B21能分泌某種抑菌物質(zhì)．平板對(duì)峙試驗(yàn)表明，這種抑菌物質(zhì)能使真菌的菌絲變粗，細(xì)胞壁產(chǎn)生空洞，造成細(xì)胞的內(nèi)容物流出，菌絲斷裂．!型!坐些盔堂堡：!堂生堡苧．——用菌絲生長(zhǎng)法對(duì)無菌發(fā)酵液有效制物質(zhì)的性質(zhì)進(jìn)行初步研究結(jié)果表明，飽和度為80％的硫酸銨能沉淀下大部分的抑菌活性，因此這種抑菌物質(zhì)很可能為多肽類的物質(zhì)．關(guān)鍵詞：生物防治；灰霉菌；芽孢桿菌；菌株篩選；菌株鑒定獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果．據(jù)我所知，
5、除了文中特￡,JJJn以標(biāo)注和致謝的地方外．論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得：j韭業(yè)型星．或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料．與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：青如青．盈簽字日期：死口二年，月砧掃學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解芝目j撾＆業(yè)碰有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定．有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁址，允許論文被查閱和借閱．本人授權(quán)主鞋酋簽生：=＆監(jiān)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采
6、用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文．(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：魏氰重簽字日期：亂磷g月≯≥日學(xué)位論文作者畢業(yè)后去向工作單位：通訊地址：導(dǎo)師簽名：a1簽字日期：2“≯年電話郵編7跏。月tg番茄灰霉生防菌的篩選、鑒定和生防機(jī)制仞探1灰霉病防治研究現(xiàn)狀文獻(xiàn)綜述1．1灰霉菌的生物學(xué)特性和培養(yǎng)條件灰霉病(graymould)是蔬菜生產(chǎn)上一種世界性的主要病害，病原為Botrytiscinerea稱灰葡萄孢，屬半知菌亞門真菌．有性世代為Sclerotiniafuckeliana(deBary)Fuckel，稱
7、富克爾核盤菌，屬子囊菌亞門．它能危害番茄?、草莓∞1、梨【4J’洋蔥151等多種蔬菜和瓜果．病原菌多從開敗的雌花侵入，致使花瓣腐爛，并且長(zhǎng)出淡灰綠色的霉層，使幼果迅速變軟，被害部位停止生長(zhǎng)、腐爛或者脫落1“，爛花或者爛果附著在莖上引起莖部病害，嚴(yán)重時(shí)下部的莖腐爛使上部枯死．李保聚【7’等通過人工接種的方法研究它的發(fā)病規(guī)律時(shí)也發(fā)現(xiàn)，灰霉菌侵染番茄果實(shí)的最初部位是殘留的花瓣和柱頭，隨后擴(kuò)展到果蒂部和臍部，最后蔓延到果實(shí)的其它部位．灰霉菌不但影響處于生長(zhǎng)期的植物，有時(shí)它不在生長(zhǎng)的植株上表現(xiàn)癥狀，而是處于潛伏狀態(tài)．在收獲后的果實(shí)儲(chǔ)藏和運(yùn)輸過程中
8、，由于儲(chǔ)藏箱中的濕度大、溫度低而大規(guī)模發(fā)病‘89”I，使得果實(shí)的市場(chǎng)價(jià)格受到嚴(yán)重影響，農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)利益受到很大損失．除了侵染蔬菜和瓜果外，灰霉菌還能侵染一些觀賞性植物如玫瑰f“I，給花農(nóng)也造成很大的經(jīng)濟(jì)損失．
