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《酒精對人骨髓間充質(zhì)干細胞成脂與成骨分化的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、授予單位代碼：學號或申請?zhí)枺?045903341361鄭州大學碩士學位論文論文題目：酒精對人骨髓間充質(zhì)干細胞成脂與成骨分化的影響作者姓名：學科門類：專業(yè)名稱；導師姓名、職稱：尹萬樂醫(yī)學骨外科王義生教授=零零六年五月鄭州人學2006年碩士研究生畢業(yè)論文酒精對人骨髓問充質(zhì)干細胞成脂與成骨分化的影響(摘要)酒精對人骨髓間充質(zhì)干細胞成脂與成骨分化的影響研究生尹萬樂導師王義生鄭州大學第一附屬醫(yī)院骨外科河南鄭州450052中文摘要目的與背景股骨頭壞死(Osteonecrosisofthef鯽oralhead，oN
2、FH)是骨科常見疾病之一，激素和酒精中毒是非創(chuàng)傷性0NFH最常見病因。非創(chuàng)傷性oNFH導致患者髖部疼痛、髖關節(jié)功能障礙，多數(shù)病程難以逆轉，尚無確切有效的治療方法，預后差，致殘率高，往往最終需要采取人工全髖關節(jié)置換術。國內(nèi)外學者對0NFH進行了大量研究，提出了多種發(fā)病機制理論，但未能完全解釋。隨著骨髓間充質(zhì)干細胞(bonemarrowmesenhymalstemcells，BMscs)研究的深入開展，發(fā)現(xiàn)BMSCs在不同條件下可以向成骨、成軟骨和成脂肪系等不同方向分化。在骨組織損傷后修復中，BMSCs也
3、發(fā)揮了相當重要的作用。同時，股骨頭和頸部缺乏骨膜結構使得股骨頭部位缺乏骨膜內(nèi)成骨，軟骨成骨能力又相對較弱，從而使得BMSCs成骨在股骨頭部位的成骨機制中占有更加重要的地位。王義生等報道，動物學實驗研究證明，酒精中毒可導致股骨頭內(nèi)造血組織減少，脂肪細胞增殖肥大，骨細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積而變性死亡。這些與酒精性oNFH的早期病理變化相一致。細胞分子生物學研究發(fā)現(xiàn)，酒精可誘導BMsCs大量成脂分化，面成骨分化受抑制。揭示了酒精性oNFH的新的發(fā)病機理。但是，目前采用人的骨髓間充質(zhì)干細胞(humanbonemarro
4、wmesenhymalstemcells，hBMSCs)研究ONFH的報道尚少。為了進一步探討人酒精性0NFH的發(fā)病機制，我們分離獲取原代人骨髓間充質(zhì)干細胞，經(jīng)傳代后，加入酒精進行體外培養(yǎng)，采用分子生物學方法，觀察酒精對hBMScs的影響。材料和方法骨髓細胞來自鄭州大學一附院臨床志愿者。獲取骨髓后，應用密度梯度離心法，按1：1體積比例將percoll(比重為1．0739／m1)離心液與稀釋后的骨髓混鄭州大學2006年碩士研究生畢業(yè)論文酒精對人骨髓問充質(zhì)干細胞成臘與成骨分化的影響(摘要)合，在室溫下離心
5、，可見到離心管中的液體分層，上層為脂肪、水層、雜質(zhì)層，底層為部分血細胞及組織碎片。收集中間交界處白膜層的單個核細胞層。移至離心管中，加入DMEM培養(yǎng)液后繼續(xù)離心兩次，棄去上清液。采用DMEM培養(yǎng)基(含青霉素loo單位／ml，鏈霉素looug／m1，10％胎牛血清，維生素C50pg／ml，L谷氨酰胺1JIlM，Hepes20IIlM)吹打混勻后，計數(shù)，以6×106／cm2接種于培養(yǎng)瓶中。置37．00c含5％cO。的孵育箱中培養(yǎng)，獲得hBMSCs。對原代hBMScs傳一代后，隨機分為兩組，實驗組加入酒精(
6、濃度為O．09M)，對照維不加酒精，繼續(xù)培養(yǎng)細胞6天。采用逆轉錄聚合酶鏈式反應(Reversetranscription—polymerasechainreaction，RT—PcR)技術，檢測細胞中成脂轉錄因子(adipogenictranscriptionfactor)PPARYmRNA和成骨基因Osteocalcin(骨鈣素)mRNA的表達。結果1．通過密度梯度離心法，貼壁分離培養(yǎng)，本實驗在體外培養(yǎng)得到hBMscs，經(jīng)傳代后得到第2代hBMScs。2．用酒精處理細胞后6天，采用RT—PcR技術檢
7、測分析，顯示實驗組細胞中PPARYmRNA呈高表達，而對照組細胞中PPARY姝NA呈f氏表達，兩組間差異有顯著性(只o．05)。實驗組細胞中OsteocalcinmRNA呈低表達，而對照組細胞中OsteocalcinmRNA呈高表達，兩組問差異有高度顯著性(尺0．01)。結論1．采用密度梯度離心法能夠在體外分離和培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞。2．O．09mol／L濃度酒精，可導致hBMscs中成脂轉錄因子PPARYmRNA高表達，同時導致hBMSCs中成骨基因OsteocalcinmRNA低表達。本實驗結果
8、表明0NFH時股骨頭骨髓內(nèi)大量脂肪堆積與成骨減少，可能與酒精誘導人骨髓問充質(zhì)干細胞成脂分化增多，成骨分化減少有關。關鍵詞酒精人骨髓間充質(zhì)干細胞逆轉錄一聚合酶鏈式反應成脂轉錄因子骨鈣素Il鄭州大學2006年碩士研究生畢業(yè)論文酒精對人骨髓間充質(zhì)干細胞成脂與成骨分化的影響(摘要)EffectofAlcoholonHumanBoneMarrowMesenchymalStemCellsDiff．erentiatingintoAdipocytesandOsteobl
