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1、第8章細菌感染的檢查方法與防治原則病原菌檢測:檢測病原菌及其抗原、代謝產(chǎn)物或核酸病原菌檢測:形態(tài)、分離與鑒定病原菌抗原的檢測其他檢測法:PCR等第一節(jié)細菌感染的診斷血清學(xué)診斷:檢測患者血清中特異性抗體標(biāo)本的采集和送檢原則無菌操作早期采集做好標(biāo)記盡快送檢一、病原菌檢測(一)標(biāo)本的采集與運送適當(dāng)標(biāo)本(二)細菌分離培養(yǎng)與鑒定1、細菌培養(yǎng)接種于適當(dāng)培養(yǎng)基,根據(jù)菌落特征作初步鑒別。2、形態(tài)學(xué)檢查(1)不染色標(biāo)本檢查法壓滴法、懸滴法,用暗視野顯微鏡或相差顯微鏡檢查(2)染色標(biāo)本檢查法革蘭染色法、單染色法、抗酸染色法、特殊染色法3、生化試驗現(xiàn)已有多種微量、快速的生化反應(yīng)試劑盒以及半
2、自動或全自動檢測儀器應(yīng)用于臨床。4、血清血鑒定已知Ab(多價、單價診斷血清)查未知Ag,常作玻片凝集試驗,確定細菌的種、型。5、動物試驗分離、鑒定致病菌,測定某些細菌的毒力;常用小鼠、豚鼠、家兔等。6、藥物敏感試驗對指導(dǎo)臨床選擇用藥,及時控制感染具有重要意義。致病菌的分離和鑒定藥物敏感試驗標(biāo)本培養(yǎng)特征形態(tài)特征生化試驗血清學(xué)鑒定動物試驗培養(yǎng)基優(yōu)點:不受抗生素使用的限制敏感性高1、酶免疫技術(shù)(EIA)酶聯(lián)免疫吸附法、酶標(biāo)免疫組化法2、協(xié)同凝集試驗3、免疫熒光技術(shù)(IF)熒光菌球法4、對流免疫電泳(CIE)5、免疫印記技術(shù)(三)病原菌抗原的檢測(四)病原菌核酸的檢測不同的細菌
3、具有不同的基因結(jié)構(gòu),通過測定細菌的特異性基因序列進行比較和鑒定。1、核酸雜交技術(shù)2、PCR技術(shù)3、基因芯片(geneclips)技術(shù)PCR二、血清學(xué)診斷原理用已知Ag檢測患者血清中未知Ab及其效價的變化,可作為感染性疾病的輔助診斷。雙份血清恢復(fù)期或一周后血清抗體效價比早期升高4倍以上(含4倍),可確診。種類直接凝集試驗(肥達試驗)補體結(jié)合試驗、中和試驗乳膠凝集試驗、ELISA人工免疫人工主動免疫artificialactiveimmunization疫苗(vaccine)類毒素人工被動免疫artificialpassiveimmunization抗毒素抗菌血清丙種球蛋白
4、其他免疫制劑第二節(jié)細菌感染的特異性預(yù)防一、人工主動免疫將疫苗及類毒素(抗原)接種于人體,使機體主動產(chǎn)生獲得性免疫力。主要用于預(yù)防。(一)疫苗第一代疫苗:死疫苗、活疫苗第二代疫苗:亞單位疫苗、基因工程疫苗第三代疫苗:DNA疫苗(核酸疫苗)1、死疫苗:傷寒、霍亂、流腦、鉤體病等死疫苗。2、活疫苗:BCG、鼠疫、炭疽、脊髓灰質(zhì)炎、麻疹等減毒活疫苗。兩種疫苗優(yōu)、缺點比較活疫苗接種次數(shù)1次接種劑量小接種反應(yīng)輕/隱性感染免疫類型體液、細胞免疫時間持久穩(wěn)定性差毒力回復(fù)有可能安全性免疫缺陷者危險死疫苗2-3次大明顯體液短暫強無好2、亞單位疫苗(subunitvaccine)利用微生物的
5、保護性抗原制成的不含有核酸、能誘發(fā)機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的疫苗。如肺炎球菌、腦膜炎球菌莢膜多糖疫苗。3、基因工程疫苗利用基因工程技術(shù)把編碼病原體保護性抗原表位的目的基因,導(dǎo)入原核或真核表達系統(tǒng)后,用表達的保護性抗原所制成的疫苗。4、核酸疫苗(nucleicacidvaccine)也稱DNA疫苗,將編碼保護性抗原的基因重組到質(zhì)粒真核表達載體上,然后將重組的質(zhì)粒DNA直接注射到宿主體內(nèi),外源基因在體內(nèi)表達的抗原刺激機體的免疫應(yīng)答。(二)類毒素是用細菌的外毒素經(jīng)0.3%~0.4%甲醛處理后,其毒性消失但保留免疫原性。如白喉、破傷風(fēng)類毒素。二、人工被動免疫輸入含有特異性抗體的免疫血清
6、、純化免疫球蛋白抗體或細胞因子等免疫制劑,使機體立即獲得特異性免疫力的過程??苟舅赜眉毦惗舅囟啻谓o馬注射,待其產(chǎn)生大量抗體后,放血并分離馬血清經(jīng)提純后制成的制劑。如TAT、TDT等??咕灞N球蛋白(1)血清丙種球蛋白從正常人血中提取的免疫球蛋白(IgG、IgM)。(2)胎盤丙種球蛋白從胎盤血中提取的免疫球蛋白(IgG)。其他免疫制劑區(qū)別要點人工主動免疫人工被動免疫免疫物質(zhì)抗原抗體、細胞因子免疫出現(xiàn)時間慢,2~4周快,立即免疫維持時間長,數(shù)年~數(shù)月短,2~3周主要用途預(yù)防治療或緊急預(yù)防兩種人工免疫方法的比較第三節(jié)細菌感染的治療抗菌藥物的種類抗菌藥物的主要作用機制抗菌
7、藥物的存在問題1.標(biāo)本采集與送檢時應(yīng)注意什么?2.試比較人工主動免疫和人工被動免疫的不同點。3.試解釋:人工主動免疫、人工被動免疫、亞單位疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗。復(fù)習(xí)思考題