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《CArich元件與YB1因子調(diào)控可變剪接的分子機(jī)制研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、中國(guó)科學(xué)院大學(xué)Unix’i21’sitvofChineseAcademvofSciences博士學(xué)位論文培養(yǎng)單位：2013年5月㈣㈣0917帥Y243TheregulatorymechanismsofC／A—richelementsandYB-1proteininalternativesplicingByShirongMuADissertationSubmittedtoTheUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequirementForthedegreeofDoctorofNatureSci
2、enceInstituteofBiochemistryandCellBiologyShanghaiInstitutesforBiologicalSciencesChineseAcademyofSciencesMay,2013C／A．rich元件與YB．1因子調(diào)控可變剪接的分子機(jī)制研究牟世榮(生物化學(xué)與分子生物學(xué))導(dǎo)師惠靜毅研究員摘要mRNA的可變剪接是產(chǎn)生真核生物蛋白質(zhì)組多樣性及調(diào)控基因表達(dá)的重要機(jī)制之一?？勺兗艚釉诩?xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化及凋亡等過(guò)程中發(fā)揮重要作用，已有研究發(fā)現(xiàn)異常的可變剪接與多種疾病相關(guān)。但是，目前對(duì)可變剪接調(diào)控機(jī)制的認(rèn)識(shí)還并不完整。C／A．rich順序是一類重
3、要的調(diào)控可變剪接的順式作用元件，廣泛存在于人類基因組中。然而，我們對(duì)這類元件調(diào)控可變剪接的分子機(jī)制知之甚少。本項(xiàng)研究以人類CD44基因作為模型，我們?cè)谕怙@子v4一v7中鑒定到一些C／A．rich順序可作為剪接增強(qiáng)子促進(jìn)剪接，并發(fā)現(xiàn)YB．1可參與調(diào)控外顯子v5的剪接。YB．1是帶有進(jìn)化保守的冷休克結(jié)構(gòu)域蛋白家族的一員，被報(bào)道可參與mRNA剪接調(diào)控，但其調(diào)控機(jī)制還不清楚。我們發(fā)現(xiàn)YB—l可結(jié)合到v5外顯子及其上游內(nèi)含子中的CAUC順序，通過(guò)與U2AF65蛋白的直接相互作用招募U2AF65到弱的多聚嘧啶區(qū)，從而激活外顯_了v5的剪接。存剪接體組裝的早期，U2AF65識(shí)別內(nèi)含子中的多聚
4、嘧啶區(qū)，并進(jìn)一步招募U2snRNP結(jié)合到分支位點(diǎn)。在哺乳動(dòng)物基因組中，有很多基因的內(nèi)含子中并不含有顯著的多聚嘧啶串，但這些基因仍然可以被很好地剪接。此外，有研究發(fā)現(xiàn)U2AF65并不是所有基因剪接發(fā)生所必需的。IJ前，關(guān)于這些現(xiàn)象發(fā)生機(jī)制的研究還并不充分。本課題中，在研究YB．1調(diào)控可變剪接機(jī)制的基礎(chǔ)上，我們構(gòu)建了U2AF65．CSD嵌合體蛋白，觀察到它可以激活v5的剪接，并發(fā)現(xiàn)UHM結(jié)構(gòu)域可能在弱的3’剪接位點(diǎn)識(shí)別中發(fā)揮重要作用。關(guān)鍵詞：mRNA剪接，C／A．rich元件，YB一1，3’剪接位點(diǎn)識(shí)別TheregulatorymechanismsofC／A—richelement
5、sandYB一1proteininalternativesplicingShirongMu(BiochemistryandMolecularBiology)DirectedbyProf．JingyiHuiAbstractAlternativesplicingisflkeymechanismforgeneratingproteomicdiversityandcontrollinggeneexpressioninhighereukaryotes．Italsoplaysacriticalroleincellproliferation，differentiationandapoptos
6、is．Misregulationofsplicingcanbedeleterioustocellsandcausediseases．However,themechanismofalternativesplicingregulationisSOfarpoorlyunderstood．C／A—richsequencesarewidespreadinhumangenome，andhavebeencharacterizedasregulatoryc／s-elementsinalternativesplicing．However,weknowlittleaboutthemechanism
7、bywhichtheyregulatesplicesiteselection．InthisstudyweusedthehumanCD44geneasamodeltostudyC／A—richelements．WeidentifiedsomeC／A—richelementsinthevariableexonsv4-v7ofCD44．a(chǎn)ndfoundthatYB-1canregulatethealternativesplicingofexonv5．YB-1isamemberoftheevolut
