資源描述：
《卵巢上皮性腫瘤DNA倍體分析及 P53 表達(dá)意義》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、卵巢上皮性腫瘤DNA倍體分析及P53表達(dá)意義【摘要】目的：觀察卵巢上皮性腫瘤(EOT)患者核DNA含量、P53蛋白表達(dá)情況,研究其與生物學(xué)行為之間的關(guān)系及臨床鑒別診斷的意義。方法：采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)162例卵巢上皮性腫瘤(EOT)石蠟包埋組織進(jìn)行腫瘤單細(xì)胞DNA倍體分析；同時(shí),采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)P53蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：53例良性腫瘤DNA倍體檢測(cè)均為二倍體；43例交界性中檢出異倍體11例,二者有顯著差異。惡性EOT與交界性EOT和良性EOT比較均有顯著差義。P53陽性表達(dá)惡性EOT與交界性EOT和良性EOT比較均有顯著差義。顯著高于后二者(X2=34.719,P＜0.0
2、01)。結(jié)論：P53陽性表達(dá)與DNA異倍體密切相關(guān),可能是腫瘤發(fā)生的機(jī)制之一?！娟P(guān)鍵詞】卵巢上皮性腫瘤DNA倍體分析流式細(xì)胞術(shù)基因P53 AbstractPurpose:ToobservethenuclearDNAcontentsandP53expressionofthepatientswithepithelialoariantumors(EOT)andtostudythebiologicalbehaviorsandtheclinicalsignificanceofthedifferentialdiagnosis.Methods:Tumorsingle-celledDNA
3、ploidywereanalyzedbyflowcytometryfor162paraffinspecimensofEOT,aswellastheexpressionlevelofP53.Results:DNAploidyof53caseswithbenigntumorwerediploid.11casesofheteroploidweredetectedin43specimensofborderlinetumor.Thereweresignificantdifferencesbetweenaforementionedgroups.MalignantEOTcompared
4、withborderlineEOTandbenignEOTweresignificantdifferent,aswellasthepositivityofP53.Conclusions:ThepositiveexpressionofP53andDNAheteroploidarecloselyrelated,andmightbeoneofthemechanismsofoncogenesis.KeyWordsepithelialovariantumor;DNAploidyanalysis;flowcytometry;gene;P53卵巢來源的良、惡性腫瘤是臨床常見腫瘤，以組織
5、細(xì)胞學(xué)形態(tài)為主要根據(jù)判斷其良、惡性有時(shí)相當(dāng)困難。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)良、惡性卵巢腫瘤進(jìn)行DNA倍體檢測(cè)分析，同時(shí)佐以免疫組化法檢測(cè)P53表達(dá)，以探討其與組織細(xì)胞學(xué)形態(tài)的關(guān)系和對(duì)臨床鑒別診斷的意義。資料與方法2003～2009年確診為卵巢腫瘤的石蠟包埋組織標(biāo)本162例，年齡35～68歲，平均48±12歲。162例EOT中，卵巢漿液性腫瘤77例，其中良性囊腺瘤21例，交界性囊腺瘤24例，漿液性囊腺癌32例；卵巢黏液性腫瘤85例，其中良性囊腺瘤32例，交界性囊腺瘤19例，黏液性囊腺癌34例。所用組織學(xué)標(biāo)本均為石蠟包埋病理組織。流式細(xì)胞術(shù)：①石蠟包埋組織的單細(xì)胞懸液的制備：50
6、μm厚的石蠟包埋組織連續(xù)切片5張，經(jīng)二甲苯脫蠟48小時(shí)；體積分?jǐn)?shù)1.00、0.95、0.70、0.50的梯度乙醇水化；加入3ml膠原酶消化液，置37℃恒溫水浴中作用消化30分鐘；尼龍網(wǎng)過濾，收集細(xì)胞懸液，1500轉(zhuǎn)/分鐘離心沉淀；PBS液漂洗，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心沉淀。全部病例均制備細(xì)胞懸液涂片，保證鏡下觀察保留完整的細(xì)胞核；再行核酸染料標(biāo)記DNA(DNA倍體分析試劑，BECKMANCOULTER公司)；30分鐘后上流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)分析，獲得細(xì)胞各個(gè)時(shí)期的分布狀態(tài)，計(jì)算出G0/G1%，S%及G2/M%。②DNA倍體分析：采用細(xì)胞周期和DNA分析軟件(MultiCy
7、cleAVforWindowsadvancedDNACellCycleAnalysisSoftware)進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的分析。DNA指數(shù)(DI)在1.0±2CV之間(0.90～1.10)為二倍體，不在1.0±2CV之間為異倍體。免疫組化檢測(cè)：一抗為鼠抗人P53單克隆抗體(購(gòu)自SANTACRUZ公司)，工作濃度為1∶100，實(shí)驗(yàn)參照說明書的方法步驟進(jìn)行操作，以乳癌P53陽性病例作為陽性對(duì)照。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：P53陽性信號(hào)呈棕黃色顆粒狀，位于細(xì)胞核；陽性細(xì)胞數(shù)＜1%為陰性，1%～24%為陽性。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)
